密蒙花中蒙花苷检测方案(快速溶剂萃取)

智能文字提取功能测试中

编号：RLC-SH-20110708 快速溶剂萃取(ASE)-高效液相色谱(HPLC)法分析检测密蒙花中的蒙花苷 检测项目 蒙花苷 仪器设备 ASE350 UltiMate3000： LPG-3400 WPS-3000 TCC-3000VWD-3000 参考资料 2010版药典 方法开发 车金水 最终审核 叶明立 中药密蒙花的主要成分蒙花苷具有抗衰老、抗缺氧、抗不良刺激、抗疲劳等作用。参照2010版药典，对蒙花苷的提取需先采用石油醚索氏提取密蒙花中的挥发油类成分，然后再进行蒙花苷的提取，该前处理方法需要消耗大量的时间和溶剂。由戴安(Dionex)生产的加速溶剂萃取仪(ASE)，很好地解决了上述问题，具有简单、快速、溶剂消耗小、萃取效率高及环境污染小等优点。采用ASE提取，建立序列(sequence)的方式，分别用石油醚和甲醇顺序提取，能够在半个小时左右的时间内处理好样品，大大的节省了前处理时间及溶剂消耗。 1、 材料与方法 标准品配制：取蒙花苷标准品适量，精密称定，加流动相配制成标准品溶液，[即得。 索氏提取：密蒙花样品粉碎至30目左右，过30目筛。提取方法参照2010版药典方法：取样品粉末1g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚100mL， 加热回流2h，弃去石油醚，药渣挥干，加甲醇100mL， 再加热回流4h，放冷，滤过，滤液置100mL容量瓶中，定容，摇匀，待HPLC分析。 快速溶剂萃取(ASE)样品处理方法：取密蒙花样品粉末1g，精密称定，加入石英砂适量，混合均匀，转至底层垫有纤维素膜的萃取池中，快速溶剂萃取，弃去石油醚提取液，甲 醇提取液过0.45m滤膜，即得。 2、仪器条件 2.1 ASE条件： 表1 ASE萃取条件 ASE条件 Step1 Step2 溶剂 石油醚 甲醇 温度 80℃ 80℃ 加热时间 5min 5min 静态萃取时间 3min 5min 循环次数 2 1-2 吹扫体积 60% 60% 吹扫时间 200s 90s 总体积 15mL 15-20mL 总时间 15min 15-20min 2.2 HPLC条件 色谱柱 Acclaim PolarAdvantage II， 120A， 4.6mm*150mm*3um 流动相 甲醇-醋酸-水(45：54.5：0.5) 流速 1.0 mL/min 柱温 30℃ 检测器 UV@326 nm 进样量 10 pL 图1标准品(上)及样品(下)色谱图 3、ASE条件选择 3.1溶剂的选择 本实验参考2010版药典方法，分别采用石油醚及甲醇作为ASE萃取溶剂。其中石油醚作为第一步萃取溶剂，除去样品中的挥发油类等脂溶性物质；第二步采用甲醇作为蒙花苷的提取溶剂，将样品中的目标成分完全萃取出来。 3.3萃取温度的选择 本实验分别考察了80℃、100℃、120℃和140℃4个温度对密蒙花中的蒙花苷萃取率的影响。萃取温度为80℃、100℃和120℃时， ASE对密蒙花中的蒙花苷的萃取效率几乎相同，萃取率为1.37%。而当温度升至140℃时，萃取率明显下降，为0.95%，可能为蒙花苷的热降解所导致的。综合考虑，采用80℃作为后续的萃取温度。 3.4静态萃取时间及循环次数 本方法考察了ASE除脂过程中循环次数的影响(静态萃取时间为3min)，当第二次萃取循环时提取液几乎为无色，故采用3min静态萃取时间，2次循环次数作为除脂过程的提取条件。 为研究静态萃取时间及循环次数对蒙花苷萃取效率的影响，本方法采用固定静态萃取时间(5min)的方法，考察不同循环次数中对蒙花苷的萃取量。实验结果表明，第一次萃取循环对蒙花苷的提取量占四次提取总量的80.8%；第二次萃取循环对蒙花苷的提取量占四次提取总量的14.8%；第四次萃取循环对蒙花苷的提取量占3次提取总量的2.7%；第四次萃取循环对蒙花苷的提取量占3次提取总量的0.7%。 3.5 ASE和索氏萃取的比较 当采用1次萃取循环作为循环次数时， ASE对密蒙花中的蒙花苷的平均萃取率为1.09%，RSD为3.6%(n=3)。同时采用2010版药典规定方法对同一样品进行萃取(方法见1.1部分)， 索氏提取的平均提取率为1.14%， RSD为7.2%(n=3)。实验结果表明： ASE对密蒙花中的蒙花苷的萃取率和药典推荐方法-索氏提取萃取率相似，但ASE更加省时，省溶剂。 表2ASE和索氏提取比较(ASE采用1次萃取循环) 萃取方法 样品量 溶剂量 耗时 萃取率 RSD ASE lg 30mL 30min 1.09% 3.6% SE lg 200mL 6h 1.14% 7.2% ASE采用2次萃取循环作为萃取循环次数时， ASE对密蒙花中的蒙花苷的平均萃取率为1.35%， RSD为2.6%(n=3)。ASE的提取率较传统的索氏提取提高了约20%，且稳定性更好。同时比较溶剂消耗量，耗时，ASE具有速度快、溶剂消耗小等优点。 表2ASE和索氏提取比较 (ASE采用2次萃取循环) 萃取方法 样品量 溶剂量 耗时 萃取率 RSD ASE 1g 35mL 40min 1.35% 2.6% SE lg 200mL 6h 1.14% 7.2% 4、结果讨论 采用ASE 顺序提取法提取密蒙花中的蒙花苷，相比较2010版药典推荐方法-索氏提取，达到了除脂和萃取有效成分同步完成的目的，节省了大量的操作步骤及操作时间，解放了劳动力。当采用1次萃取循环作为循环次数时， ASE 和2010版药典推荐方法对蒙花苷的提取率相似；当采用2次萃取循环作为循环次数时， ASE 对蒙花苷的提取效率较药典方法提高了约20%。 ASE 提取中药中的活性成分时，既能达到药典推荐萃取方法等同的萃取率，在提高萃取条件时， ASE 还能达到更高的萃取率。同时具有操作简单、快速、高效等特点，值得在中药领域推广使用。 采用 ASE 顺序提取法提取密蒙花中的蒙花苷，相比较 2010 版药典推荐方法-索氏提取，达到了除脂和萃取有效成分同步完成的目的，节省了大量的操作步骤及操作时间，解放了劳动力。当采用 1 次萃取循环作为循环次数时，ASE 和 2010 版药典推荐方法对蒙花苷的提取率相似；当采用 2 次萃取循环作为循环次数时，ASE 对蒙花苷的提取效率较药典方法提高了约 20%。ASE 提取中药中的活性成分时，既能达到药典推荐萃取方法等同的萃取率，在提高萃取条件时，ASE 还能达到更高的萃取率。同时具有操作简单、快速、高效等特点，值得在中药领域推广使用。