水产品中大环内酯类药物残留检测方案(液质联用仪)

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LC-MS/MS法测定水产品中大环内酯类药物残留含量 应用中心 前言 抗生素在动物食品产品中的使用为整个食品行业带来了诸多优势，但是，也引起了人们对于食品安全的广泛关注。大环内酯类是一组广泛用于治疗动物多种呼吸系统和肠道细菌感染的抗生素，它用量大、使用范围广且容易进入环境水体，引起水产品的质量安全问题。目前，新的国标《GB 31660.1-2019 食品安全国家标准水产品中大环内酯类药物残留的测定液相色谱串联质谱法》将于2020年4月1日正式实施。参照这个国标，我们运用LC-MS/MS系统建立了快速检测水产品中的常见大环内酯类抗生素的方法，方法灵敏度满足新国标规定的水产品中大环内酯类兽药残留的测定。 实验部分 标准品和试济：标准品：9种大环内酯类抗生素混标：购自上海安谱，于-20℃冰箱保存。 试剂：水、甲醇、乙腈、正己烷、异丙醇为色谱纯，甲酸为LC-MS级，纯度98%，乙酸铵为色谱级，纯度99%。 仪器： ULC 510超高效液相色谱仪(具体配有二元超高压输液泵、超高压自动进样器(含冷却功能)、柱温箱)、EXPEC 5210三重四极杆串联质谱仪。 图1EXPEC-5210三重四级杆串联质谱仪 液相色谱条件： 色谱柱：：CNW Athena C18-WP(2.1x150mm， 5um) 流动相： A：0.1%甲酸水溶液，B：乙腈，梯度洗脱程序见表1； 流速： 0.2mL/min；柱温： 30℃ 进样量：10ul。 表1梯度洗脱条件 时间(min) 流动相A(%) 流动相B(%) 0 95 5 2 95 5 10 5 95 11 95 5 16 95 5 质谱条件： 监测模式为多反应监测(MRM)，各化合物监测离子对、碰撞电压(CE)等参数见表2。为提高检测灵敏度，可根据保留时间分段监测各化合物。 样品前处理 样品前处理方法：具体参考《GB31660.1-2019食品安全国家标准水产品中大环内酯类药物残留的测定液相色谱串联质谱法》。 线性关系及灵敏度 精密量取9种大环内酯类抗生素混标适量，用空白基质溶液稀释，配制成大环内酯类药物浓度为1、2、5、10、20、50、100ng/ml的系列基质标准工作溶液进样分析，以浓度为横坐标，各药物峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。通过进样浓度为1ug/kg的空白基质加标样，根据信噪比 (S/N) 3得出检测限数据。所有信噪比均大于3：1，因此这9个化合物的检测限均低于1ug/kg，符合国标方法的要求。表3显示了标准曲线的结果。 表39种大环内酯类抗生素的线性 序号 名称 标准曲线 相关系数r 1 竹桃霉素 y=21835x+3419.5 0.9995 2 红霉素 v=13263x+8816.7 0.9988 3 克拉霉素 y=21835x+3419.5 0.9993 4 阿奇霉素 y=23932x+4508 0.9978 5 吉他霉素 v=25964x+4066.3 0.9996 6 交沙霉素 y=32015x+5013.9 0.9998 7 螺旋霉素 v=27897x-11734 0.9998 8 替米考星 y=13313x+2085 0.9994 9 泰乐菌素 y=29998x+4698 0.9991 精密度 对5ng/ml、20ng/ml和50ng/ml的混合标准溶液连续进样六次，考察仪器精密度，保留时间和峰面积的精密度如表4所示，各化合物精密度良好。 表4精密度实验结果 化合 (5ng/ml) (20ng/ml) (50ng/ml) 物 保留 峰面 保留 峰面 保留 峰面 时间 积 时间 积 时间 积 竹桃霉素 0.92 2.04 0.62 2.12 1.02 1.09 红霉素 1.03 3.54 1.33 2.54 1.21 2.54 克拉 霉素 1.24 4.30 1.14 3.33 0.98 4.85 阿奇 霉素 0.74 2.09 0.64 2.16 1.31 3.09 吉他 霉素 1.53 5.57 1.12 5.17 1.12 2.67 交沙 霉素 1.33 3.45 1.37 2.15 1.33 4.45 螺旋 霉素 0.87 2.31 0.93 3.31 1.67 3.31 替米 考星 1.35 3.45 1.31 2.49 1.48 2.65 泰乐 菌素 1.23 5.76 1.24 4.86 1.53 3.34 回收率 在3份鱼肉基质样品中分别加入适量混合对照品储备液，加标标度分别为5、20、50ug/kg， 在上述条件下检测。表5列出了回收率数据，图1是5ug/kg的加标鱼肉基质色谱图。 表5回收率实验结果 化合物 加标浓度ug/kg 回收率% 5 80.4 竹桃霉素 20 91.2 50 95.4 5 90.2 红霉素 20 93.1 50 101.2 5 79.3 克拉霉素 20 86.7 50 103.5 5 88.9 阿奇霉素 20 82.4 50 92.4 5 92.4 吉他霉素 20 95.3 50 99.7 5 83.1 交沙霉素 20 88.9 50 93.2 5 74.6 螺旋霉素 20 84.3 50 90.3 5 88.4 替米考星 20 85.9 50 89.5 5 94.3 泰乐菌素 20 93.2 50 105.7 应用简报： 编号：LC-MSMS 2019-005 图15ug/kg的加标鱼肉基质色谱图 结果与讨论 鱼肉样品提取后，可快速、准确对其中的9种大环内酯类兽药残留含量进行筛查测定。本文考察了方法的线性、精密度、回收率等，结果表明：9种大环内酯类兽药在检测范围内线性良好，相关系数均大于0.99；方法精密度在5.57%以内，化合物回收率均在70%~120%范围内。方法灵敏度满足新国标规定的水产品中大环内酯类兽药残留的测定。 EXPEC TECHNOLOGY 目前，新的国标《GB 31660.1-2019 食品安全国家标准 水产品中大环内酯类药物残留的测定 液相色谱串联质谱法》将于2020年4月1日正式实施。参照这个国标，我们运用LC-MS/MS系统建立了快速检测水产品中的常见大环内酯类抗生素的方法，方法灵敏度满足新国标规定的水产品中大环内酯类兽药残留的测定。