水产品中硝基呋喃类代谢物残留量检测方案(液质联用仪)

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LC-MS/MS法测定水产品中基基呋喃类代谢物残留量 应用中心 前言 硝基呋喃类药物(NF)是一种广谱抗菌药，其常见代谢物主要包括3-氨基-2-唑烷酮(AOZ)、5-甲基吗啉代-3-氨基-2-唑烷酮(AMOZ)、1-氨基乙内酰脲(AND)和氨基脲(SEM)。该类药物在水产养殖业中被广泛地使用。由于该类药物在动物体内代谢迅速， 其代谢产物与蛋白质结合会形成稳定的复合物，对人体潜在的致癌、致畸的且代谢物在动物体及环境中残留时间较长，现已被许多国家禁止用于食物类动物。我国农业部第193号公告《食品动物禁用的兽药及其它化合物清单》中明确禁止使用硝基呋喃类药物。 参考《农业部781号公告-4-2006》和《GB/T 21311-2007》，本文运用谱育LC-MS/MS系统建立了测定水产品中硝基呋喃类代谢物 (AOZ、AMOZ、AND、SEM) 残留量的分析方法。 实验部分 标准品和试剂：硝基呋喃类代谢物标准品：4种呋喃代谢物混标 (AOZ、AMOZ、AHD、SEM)、、4种呋喃代谢物内标混标(AOZ-D4、AMOZ-D5、AHD-13C3、SEM-13C-15N2) 购自上海安谱，于-20℃冰箱保存。 试剂：乙腈、甲醇、乙酸乙酯、正己烷和水为色谱级；甲酸为LC-MS级，纯度为98%；浓盐酸、令硝基苯甲醛、三水磷酸钾、乙酸铵均是分析纯。 仪器：ULC 510超高效液相色谱仪(具体配有二元超高压输液泵、超高压自动进样器(含冷却功能)、柱温箱)、EXPEC 5210三重四极杆串联质谱仪。 杭州谱育科技发展有限公司 1液相色谱条件： 色谱柱：ACQUITY LUPLC BEH1C18 (2.1*100mm， 1.7um)流动相：A：0.1%甲酸溶液；B：乙腈，梯度洗脱程序见表 流速： 0.4mL/min；柱温：40℃ 进样量：10ul。 表1梯度洗脱条件 时间 (min) 流动相A(%) 流动相B(%) 0 60 40 60 40 5 95 3.1 60 40 5 60 40 质谱条件： 扫描模式 正离子模式 毛细管高压 4.9kV 真空接口温度 110℃ 去溶剂气温度 420℃ 雾化气流量 1.6L/min 反吹气流量 2.1L/min 去溶剂气流量 6L/min 监测模式为多反应监测(MRM)，各化合物监测离子对、碰撞电压(CE)等参数见表2。为提高检测灵敏度，可根据保留时间分段监测各化合物。 *为定量离子 样品前处理 具体参考 《GB/T21311-2007动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物残留量检测方法高效液相色谱串联质谱法》。 线性关系 实验将浓度0.5，1，2，5，10ng/mL的混合标准曲线，采用内标法定量，如下图所示，在标准曲线浓度范围内线性相关，且线性相关系数(R2) 均大于0.995。 图1AMOZ的标准工作曲线 图3AOZ的标准工作曲线 图4 SEM的标准工作曲线 定量限和回收率 经过S/N>10计算得到4种硝基呋喃类化合物的定量下限均可以达到0.5ug/kg，按实验方法空白基质加标，浓度为0.5ug/kg，回收率在70%-112%之间，完全满足动物源性食品中硝基呋喃类化合物残留的限量检测要求。图5和图6分别是空白基质中4种硝基呋喃类化合物(0.5ng/mL)的色谱图和空白基质中4种硝基基喃类内标化合物 (2ng/mL)的色谱图。 图5空白基质中4种硝基呋喃类化合物(0.5ng/mL) 的色谱图 图6空白基质中4种硝基喃类内标化合物(2ng/mL) 的色谱图 平行制备浓度为0.5ng/mL，5 ng/mL，10ng/mL标样各6份，依次进样。得到统计结果如表4所示，4种硝基呋喃类化合物的保留时间(R.T)和峰面积的RSD值为0.08-0.25%和1.8-6.2%，仪器精密度良好。 表3精密度试验结果 化合物名称 RSD% (0.5 ng/mL) RSD% (5ng/mL) RSD% (10 ng/mL) R.T 峰面积 R.T 峰面积 R.T 峰面积 AMOZ 0.13 3.25 0.15 2.81 0.08 1.80 AHD 0.11 5.20 0.08 4.35 0.10 3.12 AOZ 0.15 4.36 0.23 3.92 0.15 2.32 SEM 0.2 5.33 0.25 4.65 0.12 3.25 结果与讨论 本文参考《GB/T21311-2007动物源性食品中硝基南喃类药物代谢物残留量检测方法高效液相色谱串联质谱法》建立了高抗污染能力、高灵敏度的的超高效液相色谱串联三重四极杆质谱法测定水产品中4种硝基呋喃类化合物残留量的分析方法。方法灵敏度、精密度和准确度均满足国内标准要求。 参考《农业部781号公告-4-2006》和 《GB/T 21311-2007》，本方案运用谱育LCMS/MS系统建立了测定水产品中硝基呋喃类代谢物（AOZ、AMOZ、AND、SEM）残留量的分析方法。