血浆中左炔诺孕酮检测方案(二手分析仪器)

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ApplicationNote： CM0033 TSQ Quantum Access分析人体血浆中左炔诺孕酮 叶芳挺，刘婷，孙晓娟 赛默飞世尔科技，上海Demo实验室 左炔诺孕酮 (Levonorgestrel)是一种常用的长效雌激素类避孕药。口服后经胃肠道吸收，存储于脂肪组织内，缓慢释放出快雌醇，通过抑制丘脑下部-垂体-卵巢轴来抑制卵巢排卵，它能使宫黏粘液变稠，阻碍精子穿透，又能使子宫内膜萎锁不利于孕卵着床，因而起到避孕作用1。本方法介绍了用赛默飞世尔科技TSQQuantum Access分析人体血浆中左炔诺孕酮的检测方法。 图1：左炔诺孕酮结构图 实验条件 标样准备 将左炔诺孕酮添加到空白血浆样品中，同时加入内标甲基睾酮，用乙酸乙酯提取后，离心，有机相用氮气流吹干，用甲醇：水=1：1：11流动相溶解然后将左炔诺孕酮配置成0.5ng/ml， 2ng/ml， 4ng/ml， 20ng/ml， 50ng/ml，200ng/ml和500ng/ml，用于建立校准曲线。 样品分析 添加左炔诺孕酮的血样用Surveyor Plus LC液相色谱仪和Hypersil GOLD C18色谱柱 150mm， 2.1mm， 5um进行分析。流速为500ul/min， 洗脱梯度为0-5分钟50%的溶剂B(甲醇)到100%溶剂B，再维持1.5分钟，6.5-6.6分钟100%溶剂B到50%溶剂B， 再维持3分钟。溶剂A为0.1%甲酸水。进样体积为20ul。每个浓度的样品平行测定三次。 Discharge current： 4kvVaporizer temperature： 400度Sheath gas pressure： 35 arbAux gas pressure：5arblon transfer capillary temp： 250 Collision pressure： 1.5mTorr Q1 PW：0.7 SRM信息 化合物 母离子 m/z 子离子 m/z 碰撞能量V 左炔诺孕酮 313.1 71.3 19 95.3 21 109.2 30 257.3 15 甲基睾酮 303.131 97.240 30 109.155 30 285 16 结果 左炔诺孕酮和内标甲基睾酮标样的色谱图见图2，左炔诺孕酮在本实验条件中的保留时间为3.41分钟，内标甲基睾酮为3.53分钟。 图2：左炔诺孕酮和甲基睾酮的色谱图 图3显示的是人血浆样品中左炔诺孕酮的定量工作曲线，将左炔诺孕酮峰面积与内标甲基睾酮的峰面积比值对浓度作线性回归，权重1/X，得到线性相关系数r^2=0.998， 回归方程为y=0.0019+0.004*x。标准浓度的峰面积、浓度计算值以及精密度在表1中列出。 图3：左炔诺孕酮人血浆样品添加校准曲线 表1：人血浆样品中左炔诺孕酮添加浓度计算值 fle Hanse pectoAmouat CaloulatedAmisn %DIT SRSD-AMT tts Sartple2-1 0500 0500 0454 DA22 -333 -1568 593 691 hghi Sartple2-25aple23 0500 0.459 423 693 noni Satle3-1 2.000 1888 582 082 Sorple3-2 2000 2.000 4000 1556 1915 -556 425 002 0026.83 hil hil 4.00 4000 663 10 5mmple5-1 20 000 21.015 3500 0.63 238 nghi 11 Satele5-a 20000 20803 AD1 230 hi 12 13 Sanple5-3 5atee6-1 SarpleG-2 20000 50000 50000 20.079 52888 55761 0577 238 267 14 13 3015009-3 50000 54003 0.01 267 261 10 Sanple7-1 200D00 218433 925 598 17 Fatple7-2 200000 202.703 135 590 18 5vtedn7-3 200000 14329 484200 -284 59 296 Satales-1Fapled-2 500000 500000 479.300 -316 412 296 21 50 50655 me (min) 图4：原样空白和2ng/ml 基质添加样 质谱仪： Thermo Fisher TSQ Quantum Access wThermo Fisher Scientific，San Jose， CA USA is ISO Certified.Part of Thermo Fisher Scientific 左炔诺孕酮（Levonorgestrel）是一种常用的长效雌激素类避孕药本方法介绍了用赛默飞世尔科技TSQ Quantum Access分析人体血浆中左炔诺孕酮的检测方法。