鸡肉中金刚烷胺检测方案(液相色谱仪)

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SSL-CA20-087Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-461 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cn Tel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn LCMS-8045 测定鸡肉中金刚烷胺的残留 LCMSMS-461 摘要：本文建立了一种使用岛津液相色谱串联质谱 LCMS-8045 测定鸡肉中金刚烷胺的方法。市售鸡肉样品经提取和净化后，用超高效液相色谱 LC-40 进行分离，，3三重四极杆质谱仪 LCMS-8045 进行定性和定量分析。金刚烷胺在2 ug/L~200 ug/L 浓度范围内线性良好，标准曲线的相关系数为0.9999；对2.0、10和100ug/l低中高不同浓度的标准工作液连续测定6次，保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在 0.06%~0.09% 和0.46%~1.56%之间；添加浓度为2、10和100 ug/kg鸡肉样品，回收率在89.7~95.6%之间，该方法可适用于鸡肉样品中金刚烷胺残留测定。 金刚烷胺 (Amantadine) 是饱和三环癸胺的氨基衍生物，是首个被 FDA 批准的抗流感病毒药物，对动物禽流感等病毒性疾病有预防效果。虽然许多国家禁止在家禽养殖中使用金刚烷胺，但伴随着畜禽规模化养殖，金刚烷胺仍被非法用于家禽(尤其是鸡)养殖中。被代谢的药物在鸡肉中残留通过食物链传递在人体内积蓄，造成机体的耐药性，我国已有20%的动物源性甲型流感病毒对金刚烷胺产生耐药性。2012年12月，山东一些地方养鸡场被曝违规使用金刚烷胺等抗病毒兽药养殖“速成鸡”，并供给肯德基、麦当劳，)引起了巨大的轰动效应。早在2005年，我国农业部曾发出 《关于清查金刚烷胺等抗病毒药物的紧急通知》，明确要求立即停止生产、经营和使用金刚烷胺、金刚乙胺等，违者按生产、经营假兽药和使用禁用兽药处理。 目前，金刚烷胺的检测多为柱前衍生化后，采用HPLC-荧光法或 GC 法测定，不仅操作繁琐、费时，而且灵敏度不高。本文根据GB 31660.5-2019《动物性食品中金刚烷胺残留量的测定液相色谱-串联联谱法》，建立了高灵敏度、高选择性的液相色谱-串联质谱方法，用于测定鸡肉中金刚烷胺的残留，供广大分析检测人员参考使用。 实验部分 1.1仪器 本实验使用岛津超高效液相色谱仪LC-40 与三重四极杆质谱仪 LCMS-8045联用系统。具体配置为 LC-40DX3 ×2输液泵， DGU-405 在线脱气机， SIL-40C X3自动进样器， CTO-40C 柱温箱，SCL-40 系统控制器，LCMS-8045三重四极杆质谱仪， LabSolutions Ver. 5.97 色谱工作站。 1.2分析条件 液相条件色谱柱： Shim-pack GIST C18(150mm×2.1 mm l.D.， 3 um， SGLC， P/N：227-30008-07) 流动相：A相-0.1%甲酸水溶液；B相-甲醇 流速：0.30 mL/min 进样体积：2uL 洗脱方式：梯度洗脱，，初始浓度为B 相10%，时间程序见表1. 表1 梯度洗脱时间程序 Time Module Command Value 1.50 Pumps Pump B Conc. 10 2.00 Pumps Pump B Conc. 90 5.00 Pumps Pump B Conc. 90 5.10 Pumps Pump B Conc. 10 10.00 Controller Stop 质谱条件 离子源：ESI，正离子模式 DL管温度：250℃ 离子源接口电压：0.5kV雾化气：氮气3.0 L/min干燥气：氮气10 L/min 加热模块温度：400℃ 接口温度：300℃ 扫描模式：多反应监测(MRM) 加热气：空气10 L/min MRM参数：见表2 碰撞气：氩气 驻留时间：74ms 表2 MRM参数 化合物名称 英文名称 CAS No. 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bais(V) CE(V) Q3 Pre Bais(V) 金刚烷胺 152.1 135.2* -10 -17 -24 Amantadine 768-94-5 93.1 -10 -28 -16 Di5-金刚烷胺 D15-Amantadine / 167.1 150.2 -13 -19 -21 *表示定量离子 1.3标准品溶液的配制及样品前处理 标准工作溶液配制： 用甲醇配制 1 mg/L的金刚烷胺和 D15-金刚烷胺的标准工作溶液，再用50%乙腈水溶液稀释成2 ug/L、4 ug/L、10ug/L、20 ug/L、100ug/L和200 ug/L 不同浓度的标准工作液， D15-金刚烷胺的浓度均为 20 ug/L。鸡肉样品前处理： 称取试料2g(准确至±20mg)， 于50mL离心管中，加D15-金刚烷胺标准工作液20uL，加1%乙酸乙腈溶液10mL， 漩涡2 min， 3000 r/min 离心5 min， 上清液转入另一50mL离心管中，重复提取一次，合并两次上清液，备用。取备用液，加无水硫酸钠3 g、正己烷10 mL， 涡旋 1 min， 3000 r/min 离心5 min，弃去正己烷层，剩余溶液转至100mL鸡心瓶中，40℃水浴下旋转蒸干，用1.0mL甲醇溶解残渣。加入 PSA50 mg， 涡旋30s，取上清液过滤膜至1.5 mL试管中，量取滤液0.5mL于离心管中，40℃氮气吹干，加入50%乙腈水溶液0.5mL，涡旋30s， 10000 r/min 离心 5 min，取上清液供上机测定。 结果与讨论 2.1标准样品的 MRM 色谱图 图1 2 ug/L金刚烷胺标准样品的色谱图(内标20pg/L) 2.2线性关系 将2、4、、.10、20、100和200 ug/L 不同浓度的标准工作液按1.2中的分析条件进行测定，内标法定量。以浓度比为横坐标，峰面积比为纵坐标，绘制校准曲线如图2所示；所得校准曲线线性关系良好，线性方程为Y=(0.0415)X-(0.0027)；相关系数R²= 0.9999。 图2金刚烷胺校准曲线 2.3精密度试验 对2ug/L、10 ug/L 和 100 ug/L三个浓度标准工作液连续测定6次，考察仪器精密度。结果显示：不同浓度标准品保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.06%~0.09%和0.46%~1.56%之间，仪器精密度良好。 表3金刚烷胺保留时间和峰面积重复性结果(n=6) Conc.(ug/L) RSD% (R.T.) RSD% (Area) 2.0 0.06 1.56 10 0.09 0.46 100 0.07 0.52 2.4灵敏度实验 图3为 0.1 ug/L金刚烷胺的 MRM 色谱图。根据检出限MDL=3.3 S/N，定量限 LOQ=10 S/N 计算检出限和定量限，分别为0.03和0.08 ug/L。 图3 0.1 ug/L 金刚烷胺标样 MRM 色谱图 2.5基质加标实验 取空白鸡肉样品2g，加入少量金刚烷胺标准工作液，使加标浓度为2、10和100 ug/kg，样品经提取与净化后，按照1.2中的分析条件测定金刚烷胺的加标回收率，回收率在89.7~95.6%之间。图4为空白鸡肉的MRM色谱图，加标浓度为 2 ug/kg 样品 MRM 色谱图如5所示。 Q152.10>135.20(+) 4.70e5 图4 空白鸡肉样品 MRM 色谱图 图5 2 ug/kg 加标样品 MRM 色谱图 结论 建立了一种使用岛津三重四极杆质谱仪LCMS-8045 测定鸡肉中金刚烷胺残留的方法。鸡肉样品经提取和净化后，用超高效液相色谱 LC-40 进行分离，三重四极杆质谱仪LCMS-8045 进行定性和定量分析。金刚烷胺在2 ug/L~200 ug/L 浓度范围内线性良好；对不同浓度的标准工作液连续测定6次，保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.06%~0.09%和0.46%~1.56%之间。添加浓度为2、10和100 ug/kg鸡肉样品，回收率在89.7~95.6%之间。本方法操作简单，可用于鸡肉中金刚烷胺的快速高灵敏度检测。 岛津应用云 本文建立了一种使用岛津液相色谱串联质谱LCMS-8045测定鸡肉中金刚烷胺的方法。市售鸡肉样品经提取和净化后，用超高效液相色谱LC-40进行分离，三重四极杆质谱仪LCMS-8045进行定性和定量分析。金刚烷胺在2 μg/L~200 μg/L浓度范围内线性良好，标准曲线的相关系数为0.9999；对2.0、10和100 μg/L低中高不同浓度的标准工作液连续测定6次，保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.06%~0.09%和0.46%~1.56%之间；添加浓度为2、10和100 μg/kg鸡肉样品，回收率在89.7~95.6%之间，该方法可适用于鸡肉样品中金刚烷胺残留测定。