黄柏中盐酸小檗碱及盐酸巴马汀检测方案(液相色谱仪)

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高效液相色谱法测定关黄柏中的盐酸小檗碱及盐酸巴马汀 关黄柏性寒、味苦，可以清热燥湿，泻火除蒸，解毒疗疮。关黄柏被收录于2020年版《中国药典》中，有阴虚火旺，盗汗骨蒸的功效。 功效：煎剂或乙醇浸液关黄柏，对各种病原菌均有不同程度的抑制作用，并且关黄柏具有显著而持久的降压作用，其提取物100毫克/千克皮下注射，对阿司匹林或结扎幽门引起的胃溃疡有显著抑制作用，对水浸法应激性溃疡也有效。 关黄柏也可以对抗激素的不良反应，如果长期服用大量激素导致出现烦躁、抑郁的情况时，可以使用关黄柏来进行缓解。 在关黄柏中盐酸小檗碱及盐酸巴马汀是主要的活性成分。其中盐酸小檗碱对痢疾杆菌、大肠杆菌、肺炎双球菌、金葡菌、链球菌、伤寒杆菌及阿米巴原虫有抑制作用。盐酸巴马汀具有抗细菌感染、病毒感染、真菌感染的作用。 在2020年版《中国药典》规定，可利用高效液相色谱法测定制关黄柏中盐酸小檗碱及盐酸巴马汀的含量以控制药物质量。 1仪器与试剂 2.1仪器 悟空 wooking K2025 高效液相色谱仪，超声波清洗仪，分析天平 2.2试剂 乙腈，水，磷酸二氢钠，磷酸 2实验方法 3.1对照品溶液的制备 分别称取盐酸小檗碱及盐酸巴马汀各 5mg用60%乙醇溶液定容至100mL。 3.2 样品前处理 取本品粉末约 0.2g，精密称定，置50mL量瓶中，加入60%乙醇40mL，超声处理(功率250W ， 频率40kHz) 45分钟，放冷，加60%乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 3.3色谱参考条件 仪器：高效液相色谱仪： K2025 P2二二高压输液泵、K2025 AS 自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025UVD 紫外-可见光检测器； 流动相：A：乙腈；B：0.1%磷酸水溶液(加入磷酸二氢钠使其达到 0.02mol/L的浓度)柱温：35℃； 进样量：10pL； 流速：1mL/min； 波长：345nm； 梯度洗脱程序见表1： 表1梯度洗脱程序 时间/min A%(乙腈) B%(0.1%磷酸水溶液(加入磷酸二氢钠使 其达到 0.02mol/L的浓度)) 0 25 75 20 25 75 40 65 35 45 90 10 50 90 10 50.1 25 75 65 25 75 3结果与讨论 4.1实验结果 按照上述色谱条件进行采集，对照品溶液色谱图和样品色谱图如下： (1)对照品溶液重复性 图1对照品溶液进样7针的重复性 表2对照品溶液进样7针重复性数据统计 1 2 3 4 5 6 7均值 SD RSD% 最大值 最小值 极差 保留时间 盐酸小檗碱 17.602 17.672 17.652 17.648 17.652 17.648 17.648 17.646 0021197484 0.120 17.672 17.602 0.070 盐酸巴马汀 19.597 19.675 19.648 19647 19.655 19.647 19.647 19.645 0023540239 0120 19.675 19.5971 0078 峰面积 盐酸小檗碱 盐酸巴马汀 2030.941 1900.193 2028.295 1898.746 2027.249 1895.346 2028.68 1897.592 2026.704 1890.715 2030945 1900062 2035.445 1907.293 2029.751 1898564 3002070436 5.066776077 0.148 0267 2035.445 1907293 2026.704 1890.715 8.741 16.578 (2)供试品溶液重复性 图2供试品溶液进样7针的重复性 表3供试品溶液进样7针重复性数据统计 保留时间 1 2 3 4 5 6 7均值 SD RSD% 最大值 最小值 极差 盐酸小檗碱 17.485 17.442 17.438 17417 17.462 17448 17.408 17.443 0026066764 0.149 17485 17.408 0077 盐酸巴马汀 19.412 19.357 19.347 19328 19.388 19.365 19.318 19.359 0032851759 0170 19412 19.318 0094 盐酸小檗碱 860.168 860.827 861.465 864149 860.462 861872 860.29 861319 1396196023 0.162 864.149 860.168 3.981 峰面积 盐酸巴马汀 1319.06 1320566 1321.011 1322167 1320.686 1322397 1321.91 1321.114 1162004508 0088 13223971319.060 3.337 4.2结论 保留时间以及峰面积的 RSD( n=7)均小于0.3%，满足《中国药典2020年版》小于2.0%的要求，因此，使用 wooking K2025的高效液相色谱仪测定关黄柏中盐酸小檗碱及盐酸巴马汀有良好的重复性。 -- -- 关黄柏性寒、味苦，可以清热燥湿，泻火除蒸，解毒疗疮。关黄柏被收录于2020年版《中国药典》中，有阴虚火旺，盗汗骨蒸的功效。 功效：煎剂或乙醇浸液关黄柏，对各种病原菌均有不同程度的抑制作用，并且关黄柏具有显著而持久的降压作用，其提取物100毫克／千克皮下注射，对阿司匹林或结扎幽门引起的胃溃疡有显著抑制作用，对水浸法应激性溃疡也有效。 关黄柏也可以对抗激素的不良反应，如果长期服用大量激素导致出现烦躁、抑郁的情况时，可以使用关黄柏来进行缓解。