燕窝中酸含量检测方案(液相色谱仪)

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燕窝中唾液酸含量测定方法：高效液相色谱法 唾液酸，俗名燕窝酸，为燕窝中最珍贵的营养成分，学学叫"N-乙酰基神经氨酸"，是一种天然存在的炭水化合物。它最初由颌下腺粘蛋白中分离而出，也因此而得名。唾液酸通常以低聚糖，糖脂或者糖蛋白的形式存在。 唾液酸是一系列神经氨酸的衍生物，在生物界中是一种普遍存在的物质，广泛存在于脊椎动物、哺乳动物及多种植物组织中，是细胞膜蛋白的重要组成部分。燕窝含有高达8%以上的唾液酸，据研究分析表示，燕窝中中唾液酸含量是普通物质中唾液酸含量的50倍，并且燕窝是唯一能直接从食物中获取大量唾液酸的途径。 1.唾液酸—智力发育的"脑黄金" 生物医学研究中指出，母乳中的唾液酸与儿童早期智力发展水平有直接关系，唾液酸可促进大脑神经細胞的资讯传达速度，通过与大脑細胞膜及突触的相互作用，提高大脑的反应速度。因此給婴幼儿补充唾液酸，可以增加大脑智力发育，从而提高记忆力。 2.唾液酸一排毒抗菌，提高人体免疫力 唾液酸不会被消化道的酶降解，它所形成的糖蛋白可阻断病原体对上皮细胞的附着，能够提高细胞辨别能力、霍乱毒素解毒、预防病理性大肠杆菌的感染、调控血液蛋白质的半衰期，从而有效提高人体免疫机能。同时燕窝可以提高肠道对于维生素及矿物质的吸收能力，提高婴儿与母亲的免疫能力，让胎儿更强壮。 3.唾液酸一延缓细胞老化，延年益寿 人体细胞表面有一层厚厚的唾液酸层，调节細胞寿命与细胞资讯传达，唾液酸的缺乏可导致新陈代谢中血球寿命以及酶蛋白的减少。口服燕窝可以提高体内唾液酸的浓度，防止细胞表面的唾液酸脱落，延缓细胞老化，有延年益寿的作用。 只是随着燕窝产品的不断增多，市面上各种产品也鱼龙混杂，为了规范燕窝产品的市场，中国药文化研究会分别在2018年及2020年发布了即食燕窝及鲜炖燕窝的团体标准。 《T/CPCS 001-2018 即食燕窝》及《T/CPCS 001-2020鲜炖燕窝》中规定了唾液酸的含量，规范了燕窝产品的市场。 唾液酸含量的测定是燕窝产品必要的检测项目，本实验采用高效液相色谱法测定燕窝及其制品中的唾液酸含量。 实验部分 高效液相色谱法测定燕窝及其制品中的唾液酸 仪器与试剂 仪器 Wooking K2025高效液相色谱仪、分析天平、恒温水浴锅。 K2025高效液相色谱仪 试剂 乙腈、冰乙酸、磷酸、唾液酸(N一乙酰神经氨酸，C11H19NOg)：纯度大于99%。 十 实验方法 干燕窝 取适量试样105℃烘干 60min，放在干燥器中冷却，用研钵研成细粉，准确称取试样0.1g(精确至0.0001g)，于25mL比色管中，加入50%乙酸溶液10mL，盖玻璃塞，置于100℃水浴中水解 10min ， 取出比色管，冷却至室温，将水溶液转移至100mL容量瓶中，用流动相定容至刻度，混匀，取上清液用0.45um针筒式过滤，待测。 冰糖燕窝制品 取适量试样于烧杯中，以转速10000r/min 匀浆 3min ， 静置至泡沫消除，准确称取式样10g(精确至0.01g)，置于透析袋中(试样体积不超过透析袋容积的20%)，扎紧透析袋两端，置于1000mL烧杯中在流水下透析24h，透析后，将此透析袋浸泡于10%聚乙二醇溶液中使水析出，至袋中试液体积小于5mL，将试液转移至5mL比色管中，加少量水冲洗 透析袋合并至比色管中，加等体积冰乙酸，使水解液中乙酸浓度为50%。用玻璃塞塞好比色管，置于100℃水浴中水解 10min ， 取出比色管冷却至室温。将水解液转移至100mL 容量瓶中，用流动相定容至刻度，混匀，取上清液用 0.45pm针筒式过滤器过滤，待测。 色谱参考条件 仪器：高效液相色谱仪：K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS 自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 UVD紫外-可见光检测器、Wookinglab 色谱工作站； 色谱普： 300SCX阳离子交换色谱柱4.6×250mm， 5pm或者相当的色谱柱； 流动相：乙腈-0.1%磷酸水溶液(90+10，体积比)； 柱温：30℃； 进样量：10pL； 流速：1.0mL/min； 波长：205nm。 结果与讨论 实验结果 按照上述色谱条件进行采集，唾液酸标准溶液色色图和和品色谱图如下： 标准品 st100 溶液色谱图 图1对照品 st100 溶液色谱图 干燕窝色谱图 图2干燕窝溶液色谱图 冰糖燕窝制品色谱图 图3冰糖燕窝制品色谱图 标准曲线的线性 将浓度为10，20，50， 100， 200ug/mL 唾液酸标准品系列在 HPLC 上进行测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制校准曲线，线性方程及相关系数见图4，在此浓度范围内，曲线的相关系数为0.9999，线性关系良好。 图4唾液酸标准品浓度系列曲线 进样重复性测试 连续进样7针标准品，定性定量的重复性如图5及表1 图5标准品进样7针叠加色谱图 -4- 标准品 1 2 3 4 5 6 7 平均值 SD RSD% 保留时间 12.340 12.333 12.323 12.317 12.32 12.308 12.303 12.321 0.0130 0.106 峰面积 431324 428.821 430.157 429.870 430.597 428.965 429.500 429.891 0.892 0.208 表1标准品进样7针重复性数据统计 对照品进行7针重复性测试，保留时间的 RSD 为 0.106%，峰面积的RSD 为 0.208%。 干燕窝样品的重复性 连续进样7针干燕窝样品，定性定量的重复性如表2 表2干燕窝样品进样7针重复性数据统计 千薇窝 1 2 3 4 5 6 7 平均值 SD RSD% 保留时间 12255 12252 1225 12248 12237 12.22 12.213 12.239 0.0167 0.136 峰面积 461.773 465.362 464.908 464.554 466425 464.404 463.803 464461 1.446 0.311 样品进行7针重复性测试，保留时间的 RSD 为 0.136%，峰面积的 RSD 为 0.311%。 冰糖燕窝样品的重复性 连续进样7针冰糖燕窝样品，定性定量的重复性如表3 表3冰糖燕窝样品进样7针重复性数据统计 冰糖燕窝 1 2 3 4 5 6 7 平均值 SD RSD% 保留时间 11.93 11.955 11.97 11.975 11.982 11.955 11.93 11.957 0.0208 0.174 峰面积 55.212 54.908 55.012 55.242 54.906 55.586 55.356 55.175 0.251 0.455 样品进行7针重复性测试，保留时间的 RSD 为 0.174%，峰面积的 RSD 为 0.455%。 十 结论 结果表明，使用 Wooking K2025 高效液相色谱仪对干燕窝及冰糖燕窝制品中唾液酸含量进行测定，样品及标准品的保留时间的 RSD 均小于0.2%(n=7)，峰面积的 RSD 均小于0.5%(n=7)， 满足 GB/T 30636-2014标准的要求。此方法可为干燕窝及冰糖燕窝制品中的唾液酸含量的测定提供参考。 ( 参考文献 ) ( GB/T 30636-2014燕窝及其制品中唾液酸的测定液相色谱法 ) -- -- 唾液酸，俗名燕窝酸，为燕窝中最珍贵的营养成分，学名叫"N-乙酰基神经氨酸"，是一种天然存在的碳水化合物。它最初由颌下腺粘蛋白中分离而出，也因此而得名。唾液酸通常以低聚糖，糖脂或者糖蛋白的形式存在。 唾液酸是一系列神经氨酸的衍生物，在生物界中是一种普遍存在的物质，广泛存在于脊椎动物、哺乳动物及多种植物组织中，是细胞膜蛋白的重要组成部分。燕窝含有高达8%以上的唾液酸，据研究分析表示，燕窝中的唾液酸含量是普通物质中唾液酸含量的50倍，并且燕窝是唯一能直接从食物中获取大量唾液酸的途径。 1.唾液酸—智力发育的"脑黄金"生物医学研究中指出，母乳中的唾液酸与儿童早期智力发展水平有直接关系，唾液酸可促进大脑神经細胞的资讯传达速度，通过与大脑細胞膜及突触的相互作用，提高大脑的反应速度。因此給婴幼儿补充唾液酸，可以增加大脑智力发育，从而提高记忆力。 2.唾液酸—排毒抗菌，提高人体免疫力唾液酸不会被消化道的酶降解，它所形成的糖蛋白可阻断病原体对上皮细胞的附着，能够提高细胞辨别能力、霍乱毒素解毒、预防病理性大肠杆菌的感染、调控血液蛋白质的半衰期，从而有效提高人体免疫机能。同时燕窝可以提高肠道对于维生素及矿物质的吸收能力，提高婴儿与母亲的免疫能力，让胎儿更强壮。 3.唾液酸—延缓细胞老化，延年益寿人体细胞表面有一层厚厚的唾液酸层，调节細胞寿命与细胞资讯传达，唾液酸的缺乏可导致新陈代谢中血球寿命以及酶蛋白的減少。口服燕窝可以提高体内唾液酸的浓度，防止细胞表面的唾液酸脱落，延缓细胞老化，有延年益寿的作用。 只是随着燕窝产品的不断增多，市面上各种产品也鱼龙混杂，为了规范燕窝产品的市场，中国药文化研究会分别在2018年及2020年发布了即食燕窝及鲜炖燕窝的团体标准。 《T/CPCS 001-2018 即食燕窝》及《T/CPCS 001-2020 鲜炖燕窝》中规定了唾液酸的含量，规范了燕窝产品的市场。 唾液酸含量的测定是燕窝产品必要的检测项目，本实验采用高效液相色谱法测定燕窝及其制品中的唾液酸含量。实验部分