猪肉,牛奶,鸡蛋中磺胺类药物残留检测方案(组织研磨仪)

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食品m科技分析检测·Vol.41，No.10，2020 食品工科技一分析检测Science and Technology ofFood Industry 组织研磨-QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱法测定动物源食品中磺胺类药物残留以及基质效应的研究 张虹艳，邱国玉吴福祥许晓辉李晨曦潘秀丽，王小乔* (兰州市食品药品检验所，甘肃兰州730050) 摘要：建立起组织研磨-QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱法测定动物源食品中磺胺类药物残留的分析检测方法。样品用 EDTA 缓冲液溶解后，通过组织研磨仪高速处理样品，以乙腈提取目标化合物经Bond QuEChERS 提取、QuEChERS EMR-Lipid净化使用三重四极杆液质联用仪进行分析。Cig色谱柱分离0.1%甲酸-乙腈梯度洗脱外标法定量。结果表明，10种磺胺在一定浓度范围内线性关系良好决定系数(R)均大于0.99，目标化合物检出限(S/N=3)为0.2 ug/kg 定量限(S/N=10)为0.5 ug/kg。方法平均回收率为89.4%~111.0%相对标准偏差(n=6)为 0.8%~4.9% ，该方法操作简单，回收率高适用于动物源食品中磺胺类药物残留的测定。低质量浓度的磺胺类药物在猪肉、牛奶、鸡蛋中均存在明显基质效应采用基质匹配标准曲线校正法可以对基质效应产生的影响进行补偿与消除。 关键词：组织研磨基质效应，磺安动物源食品三重四极杆液质联用仪 Determination of Sulfonamides in Animal-originated Foods byGrinder-QuEChERS-High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry and Research on Matrix Effects ZHANG Hong-yan ，QIU Guo-yu ，WU Fu-xiang XU Xiao-hui ，LI Chen-xi ，PAN Xiu-li ，WANG Xiao-qiao(Lanzhou Food and Drug Inspection Institute ，Lanzhou 730050 ，China) Abstract： A method based on grinder-QuEChERS coupled with high performance liquid chromatography-tandem massspectrometry( UPLC-MS/MS) was developed for the determination of ten sulfonamides residues in animal-originated food.Aftermixing with EDTA the sample was grinded ，extracted with acetonitrile and Bond QuEChERS ，purified by QuEChERS EMR-Lipid analysed by HPLC-MS/MS.The separation of sulfonamides was carried out on a Cig column with a gradient elution of0.1% acetate and acetonitrile.The results showed that the 10 kinds of sulfonamides had a good linear relationship in a certainconcentration range with correlation coefficients(R) greater than 0.99.The limits of detection(S/N=3) were 0.2 ug/kg ，thelimits of quantitation(S/N=10) were 0.5 pg/kg.The average recoveries of sulfonamides were 89.4%~111.0% and the relativestandard deviations( RSDs) were 0.8%~4.9%.The method with a simple operation and a high recovery was suitable for thedetermination of 10 sulfonamides in animal- originated food. Furthermore ，matrix-matched calibration curve could be used tcompensate or eliminate the matrix effects in analysis of low concentration sulfonamides in swine milk and egg samples. Key words： grinder； matrix effect； sulfonamides； animal- originated foods； high performance liquid chromatography- triplequadrupole mass spectrometry( HPLC-MS/MS) 中图分类号： TS207.3 文献标识码：A 文章编号：1002-0306(2020)10-0259-07 doi： 10.13386/j. issn1002-0306.2020.10.043 引文格式：张虹艳，邱国玉吴福祥祥.组织研磨-QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱测测定动物源食品中磺胺类药物残留以及基质效应的研究[J].食品工业科技202041(10)：259-264 270. 随着人民生活水平的改善，药物残留日益受到关注。磺胺类药物( sulfonamides ，SAs) 是一类含有对氨基苯磺酰胺结构的广谱抗菌药物，广泛的应用 于畜牧和水产养殖。由于养殖户在预防和治疗动物疾病过程中的不规范使用，导致动物源食品中出现抗菌类药物残留。磺胺类药物残留通过食物链进 ( 收稿日期：2019-08-27 ) ( 作者简介：张虹艳(1986-)女 硕 士研究生，研究方向：食品安全检测技术 ，E-mail： 329464276@ qq.com。 ) ( *通讯作者：王小乔(1973-)女 本 科高级工程师，研究方向：食品安全，E-mail：378510575@ qq.com. ) 入人体会引起过敏反应、肠道菌群失调等副作用3.我国以及欧盟对动物源性食品中磺胺类药物残留限量有严格规定我国农业部第235号公告要求动物源性食品以及组织中磺胺类总量最大残留限量为100 pg/kg. 目前，磺胺类药物残留的检测方法主要有高效液相色谱法4-5]、液相色谱-串联质谱法【6-7]、毛细管电泳免疫分析法。高效液相色谱法通用性强；免疫分析法专属性高、操作简易；毛细管电泳分离效能高、试剂、耗材消耗少，但是上述三种方法均存在灵敏度低的问题，不适用于痕量物质的检测。液相色谱-串联质谱法通过保留时间、特征离子对以及离子对丰度比进行定性定量分析，方法专属性强，灵敏度高，越来越成熟的应用于药物残留检测。药物残留检测中应用较多的前处理技术有固相萃取(SPE)[10-11]、加速溶剂萃取(ASE)I12]、基质分散固相萃取(MSPD)T13-14]、QuEChERS[15-16]、微波辅助萃取(MAE)[17]、磁性固相萃取[18-19] 上述前处理方法过程复杂，大多数需要经过提取、净化、浓缩等步骤，既消耗了大量的时间和耗材同时降低了方法的检测灵敏度，磁性固相萃取技术多以石墨烯为材料，成本较高。QuEChERS 法具有高通量、低成本、节省试剂和耗材的优势，被广泛应用于果蔬、植物、谷物、肉类的检测，并纳入GB23200.113-2018(植物源性食品中208种农药及其代谢物残留量的测定)。由于动物源性食品基质复杂，前期的研究大多未考虑不同样品基质对定量结果的影响。基质效应主要指试样中的非待测组分影响待测物浓度或质量测定的准确度，引起待测物响应值增加或减少的现象20]。不同的前处理方法、不同的样品来源、不同的色谱分析条件、不同的离子源都会产生基质效应。样品中的共流物与目标成分产生离子竞争，从而导致目标物的离子化效率升高或者降低引起基质效应增强或者基质效应抑制21]，是导致液相色谱-串联质谱法定量分析结果不准确的直接原因。 针对上述情况，本实验以猪肉、牛奶、鸡蛋为研究对象采用组织研磨仪-QuEChERS-三重四极杆液质联用仪对动物源性食品中磺胺类兽药残留进行研究。组织研磨仪采用上下垂直高速振荡模式，可以促进细胞快速破碎、细胞裂解、组织匀浆，使得样品研磨更加均匀、充分，样品重复性好，样品之间没有交叉污染，同时节省了时间和人力成本的消耗，是一种高通量高速率高效的样品前处理技术。研究不同条件下组织研磨仪对磺胺类药物提取效果的影响并探索猪肉、鸡蛋、牛奶三种动物源性食品的基质效应为优化兽药残留检测方法、提高兽药残留检测技术提供数据支持和理论依据。 1 材料与方法 1.1 材料与仪器 猪肉(后腿)、牛奶(未脱脂)、鸡蛋 均为兰州市超市采购；磺胺间二甲氧嘧( SDM 纯度≥99.4%)、磺胺邻二甲氧嘧啶(SDX，纯度≥99.1%)、磺胺喹沙啉 (SQX，纯度≥98.9%)、甲氧苄啶(TMP，纯度≥99.8%)、磺胺氯哒嗪(SCP 纯度≥99.1%)、磺胺间甲氧嘧啶(SMM ，97.0%)、磺胺二甲嘧啶(SM2，纯度≥100.0%)、磺胺甲基嘧啶(SMR，纯度≥99.7%)、磺胺甲恶(SMZ，纯度≥99.5%)、磺胺嘧啶(SDZ，纯度≥99.7%) 德国 Dr.Ehrenstorfer 公司；乙腈 色谱纯默克公司； QuEChERS 萃取盐包(5982-0032)、EMR-Lipids 净化管(5982-1010) 安捷伦； EDTA缓冲液(柠檬酸8.4g磷酸氢二钠7.1 g，乙二胺四乙酸二钠19.5 g溶于650mL水中)。 1290-6460 三重四极杆液质联用仪 美国安捷伦； GENO2010 组织研磨仪美国 SPEX；5810R冷冻离心机 德国艾本德； VORTEX KB-3涡旋振荡器 中国海门其林贝尔； MS105DU 电子天平 美国梅特勒。 1.2 实验方法 1.2.1 标准溶液配制 标准品储备备：准确称取10种磺胺类药物标准品各10.00mg分别用乙腈溶解并定容于10 mL容量瓶中，得到1mg/mL 磺胺类药物标准品的储备液于4℃冰箱中保存。 混合标准溶液：分别精密移取各标准品储备液0.1mL至100mL容量瓶中，用乙腈稀释并定容，配成浓度各为 1.0 ug/mL的混合标准溶液于4℃冰箱中保存。 基质标准溶液：称取与试样基质相应的阴性样品加入混合标准溶液适量与样品同时进行提取和净化。 1.2.2 样品前处理 将猪肉和鸡蛋进行匀浆处理，牛奶直接取样。准确称取2.0g(精确至0.01 g)以上样品置于50 mL 离心管中，加入3mL EDTA 缓冲液，组织研磨仪以1000 r/min 的转速提取2 min 准确加入5mL乙腈涡旋1 min ，加入 Bond QuEChERS 萃取盐包涡旋1 min ，静置10 min ，在4℃以8000r/min低温离心5 min ，水和乙腈分层，收集上层液作为提取液。净化管中，加入水2.5mL 涡旋3s准确加入上述乙腈提取液2.5mL，涡旋1 min，在4℃以8000r/min低温离心5 min ，上清液过0.22 pm 滤膜，于高效液相色谱-串联质谱仪测定。 1.2.3 分析条件 1.2.3.1 色谱条件 色谱柱： Cs(2.1×100 mm，2um)；柱温：35℃；进样量：5 uL；流速：0.3 mL/min；流动相：A为0.1%甲酸溶液，B为乙腈。梯度洗脱程序：0~1.0 min 95% A； 1.0~2.5 min 95%~75%A；2.5~5.0 min 75% A~40% A；5.0~6.0 min40% A；6.0~6.1 min ，40%A~5%A；6.1~8.0 min ，5%A；8.1~10.0 min 95% A. 1.2.3.2 后质谱条件 电喷雾离子(ESI)源；多反应监测(MRM)模式检测；雾化气温度：300℃；雾化器流速：11 L/min ，喷雾电压：15 psi。其余质谱参数见表1。 1.3 数据处理 采用安捷伦液质自带数据处理软件 MassHunter( B.06) 进行数据处理和分析。 表1 10种磺胺类物质的质谱参数 Table 1 Mass parameters of the ten sulfonamides 序号 化合物 分子量 母离子 子离子 锥孔电压 碰撞能量 极性 (Da) (m/z) (m/z) (eV) (eV) 甲氧苄啶(TMP) 290.32 291.1 230 80 30 正离子模式 261 25 2 磺胺嘧啶(SDZ) 250.28 251 108 60 24 正离子模式 156 35 3 磺胺甲基嘧啶( SMR) 264.3 265 172 60 24 正离子模式 156 25 4 磺胺二甲嘧啶(SM2) 278.33 279 186 70 25 正离子模式 156 25 5 磺胺间甲氧嘧啶(SMM) 280.3 281 108 70 25 正离子模式 156 30 6 磺胺氯哒嗪( SCP) 284.72 285 155.9 60 20 正离子模式 108.1 25 7 磺胺邻二甲氧嘧啶( SDX) 310.33 311 156 70 25 正离子模式 108 40 磺胺甲恶唑(SMZ) 253.28 254 108 65 23 正离子模式 156 35 9 磺胺间二甲氧嘧啶( SDM) 278.33 311 156 70 25 正离子模式 107.8 35 10 磺胺喹沙啉( SQX) 300.34 301 108 70 25 正离子模式 156 35 2结果与分析2 流动相优化 分别比较了水-乙腈、0.1%甲酸溶液-乙腈、0.2%甲酸溶液-乙腈、10 mmol/L 乙酸铵溶液-0.1%甲酸-乙腈流动相体系梯度洗脱对10种磺胺类药物响应值和分离度的影响结果如图1，使用水-乙腈梯度洗脱，10种磺胺类药物的响应值和分离度均不佳；使用0.1%甲酸溶液-乙腈、0.2%甲酸溶液-乙腈、10 mmol/L乙酸铵溶液-0.1%甲酸-乙腈梯度洗脱均能有效分离8种磺胺类药物，其中磺胺邻二甲氧嘧啶和磺胺甲恶唑分子结构相近未能基线分离，磺胺间二甲氧嘧啶和磺胺喹沙啉分子结构相近未能基线分离。使用0.1%甲酸溶液-乙腈梯度洗脱和使用10 mmol/L乙酸铵溶液-0.1%甲酸-乙腈梯度洗脱10种磺胺类药物分离度和响应强度没有明显差异，0.2%甲酸溶液-乙梯梯度洗脱响应强度最弱。因为磺胺类药物为弱碱性，在流动相中加入少量的甲酸可以促进化合物带正电荷，但是酸浓度过高，同样也会抑制其电离。使用0.1%甲酸溶液-乙腈进行梯度洗脱，10种磺胺类药物的响应值增强，峰形和分离度得到改善因此选择0.1%甲酸溶液-乙腈作为流动相进行梯度洗脱溶液。 2.2 组织研磨仪条件优化 传统的涡旋振荡提取方式，动能低，样品均匀性无法得到保证，导致实验结果重现性不好。为了使得样品研磨更加均匀、充分，样品重复性好，保证样品的重现性、有效性、可比性，组织研磨仪可设置研 图10 种磺胺类药物总离子流图 Fig.1 TIC of 10 sulfonamides standard solution 磨时间、研磨速率，保证每次研磨条件的一致性。分别设置不同研磨速率以及研磨时间，对比10种磺胺类药物的回收率，确定最优研磨速率以及研磨时间。以猪肉为实验对象，添加混合标准溶液100 pL(见1.2.1)，10种磺胺类药物的添加量为 50 ug/kg. 设定研磨速率为1000 r/min ，研磨时间分别为0.5、1、1.5、2、3min ，其余步骤按1.2.2进行样品前处理每个样品平行测定3次，外标法定量。结果见图2，随着研磨从0.5 min 逐渐升至3 min ，10 种磺胺类药物的平均回收率呈现逐渐增大再回落的趋势，研磨时间为2 min 时，10种磺胺类药物的平均回收率 最高，研磨时间为3min 时，10种磺胺类药物的平均回收率略有降低。因为动物组织随着研磨时间增长细胞破碎越充分，细胞内蛋白质等物质大量释放不利于磺胺类药物的提取。 图22不同研磨时间对10种磺胺类药物回收率的影响 Fig.2 Effects of different grinder timeon the recoveries of ten sulfonamides 设定研磨时间为2 min ，研磨速率分别为500、800、1000、1200、1400、1600 r/min(最大速率1750 r/min)其余步骤按1.2.2进行样品前处理，每个样品平行测定3次，外标法定量。猪肉在不同研磨速率下均可研磨呈肉糜状，猪肉提取液随着研磨速率升高，组织破碎越细腻均匀，颜色越浅，结果见图3.研磨速率从500 r/min 提高至1600 r/min时，10种磺胺类药物回收率呈现整体缓慢增大之后保持平稳的趋势。研磨速率提高至1000 r/min时，10种磺胺类药物的平均回收率最高，研磨速率从1000 r/min提高至1600 r/min ，回收率维持在稳定水平说明当研磨速率提升至1000 r/min时猪肉组织已研磨均匀猪肉组织达到平衡状态，因此选择1000 r/min 作为最适宜研磨速如图3所示。 图3 不同研磨速率对10种磺胺类药物回收率的影响 Fig.3 Effects of different grinder rateson the recoveries of ten sulfonamides 2.3 基质效应评价 本试验采用空白基质匹配标准校正法进行校正，使标准品和样品在质谱电喷雾接口处具有一致的离子化条件，可以有效的消除基质效应，确保定量结果的准确性相同浓度的基质标准溶液和溶剂标准溶液分别进样3针化合物的基质效应(ME)=基质标准平均响应值/溶剂标准平均响应值2。若ME>1.0则表示基质对分析物的响应产生增强效应； ME<1.0则表示基质对分析物的响应产生抑制；ME= 1.0则表示不存在基质效应[23-25]。ME 偏离1.0的程度越大基质效应越强，ME越接近1.0，基质效应越小。 2.3.1 不同磺胺类药物浓度基质效应评价 本试验以猪肉为为究对象，采用组织研磨-QuEChERS 前处理方法考察了不同浓度的磺胺类药物的基质效应，制备基质标准曲线与对应质量浓度的溶剂标准曲线对比浓度分别为2、5、10、20、50、100 ug/L六个浓度水平溶剂标准曲线基质效应的差异(对应的基质标准曲线浓度为10、25、50、100、250、500 pg/kg)。结果如图4所示，磺胺氯哒嗪( SCP) 在不同浓度下均表现为基质增强，磺胺郊甲氧嘧啶(SMM)在不同浓度下均表现为基质抑制，其他8种磺胺类药物在同一浓度水平下基质效应差异不明显。随着目标化合物浓度增大多数化合物基质效应随之减小，整体呈现出低浓度基质增强，高浓度基质抑制的趋势。可能是因为猪肉含有大量蛋白质和脂肪等成分，与磺胺类药物共流出，导致显著的基质效应。药物浓度小于10 ug/L 时(对于的基标标准曲线浓度为50 ug/kg) 基质效应显著增强。随着药物浓度增大基质相对目标化合物的浓度降低争夺离子能力降低基质效应降低并趋于稳定，但部分药物由基质增强变为基质抑制，初步推测可能和药物性质有关，目前暂无报道有待进一步研究。 图4 不同浓度磺胺类药物对基质效应的影响 Fig.4 Effects of different concentrationonthe matrix effect of ten sulfonamides 2.3.2 不同样品基质基质效应评价 本试验基于不同样品基质对分析结果的影响进行研究，以猪肉、牛奶、鸡蛋三种动物源食品作为研究对象，添加混合标准溶液，10种磺胺类药物的添加量分别为10、25、50、100、250、500 ug/kg，采用组织研磨-QuEChERS 前处理方法，选取其中高中低3个浓度点(10、50、250 ug/kg)以确定其基质效应。如表2所示待测物浓度较低时(低于50 ug/kg)，基质效应显著增强，且猪肉的基质增强效应高于牛奶和鸡蛋，牛奶和鸡蛋的基质效应相当。待测物浓度较高时(高于50 pg/kg)基质效应减弱，且猪肉、牛奶和鸡蛋的基质效应相当。猪肉中蛋白质和脂肪含量高于牛奶和鸡蛋碳水化合物含量低于牛奶和鸡蛋推测亲脂性成分的存在可能是造成磺胺类药物测定基质效应的重要原因。在同一添加浓度下10种磺胺类药物中磺胺间甲氧嘧啶在不同样品基质中差异明显，不同基质间的差异使用(最大值-最小值)/平均值进行 表2 动物源食品中磺胺类药物在 UPLC-MS/MS检测下的基质效应 Table 2 Matrix effects for UPLC-MS/MS analysis of sulfonamides in animal-originated goods 化合物 10 pg/kg 50 ug/kg 250 pg/kg 猪肉 牛奶 鸡蛋 猪肉 牛奶 鸡蛋 猪肉 牛奶 鸡蛋 甲氧苄啶 1.62 1.49 1.45 0.89 1.03 0.98 0.83 0.90 0.86 磺胺嘧啶 1.59 1.45 1.37 1.09 1.09 1.12 1.08 1.03 1.06 磺胺甲嘧啶 1.44 1.56 1.48 1.07 1.09 1.24 1.05 0.99 1.14 磺胺二甲嘧啶 1.14 1.15 1.15 0.78 0.87 0.85 0.75 0.79 0.77 磺胺间甲氧嘧啶 0.98 0.52 0.40 0.66 0.43 0.53 0.69 0.37 0.45 磺胺氯哒嗪 1.55 1.49 1.36 1.03 1.35 1.52 1.58 1.33 1.50 磺胺间二甲氧嘧啶 1.30 1.22 1.18 0.89 0.91 0.96 0.99 0.90 0.95 磺胺甲恶唑 1.68 1.75 1.46 1.09 1.22 1.34 1.20 1.04 1.14 磺胺喹沙啉 1.32 0.95 1.19 1.08 1.46 1.20 1.05 1.29 1.06 磺胺邻二甲氧嘧啶 1.49 1.32 1.31 0.99 0.94 0.93 0.85 0.83 0.82 平均值 1.41 1.29 1.24 0.96 1.04 1.07 1.01 0.95 0.97 表3110 种磺胺类药物的线性回归方程和相关系数 Table 3Regression equation correlation coefficient of 10 sulfonamides 化合物 线性方程 决定系数 线性范围 检出限LOD 定量限 LOQ (R) (ug/L) (ug/kg) (ug/kg) 甲氧苄啶 Y=557x-1028 0.9996 2~200 0.5 磺胺嘧啶 Y=207x+185 0.9980 2~200 磺胺甲嘧啶 Y=142x +92 0.9990 2~200 磺胺二甲嘧啶 Y=397x-50 0.9998 2~200 磺胺间甲氧嘧啶 Y=387x+555 0.9931 2~200 磺胺氯哒嗪 Y=178x+538 0.9995 2~200 磺胺间二甲氧嘧啶 Y=1283x-395 0.9990 2~200 磺胺甲恶唑 Y=224x+219 0.9945 2~200 磺胺喹沙啉 Y=113x+703 0.9920 2~200 磺胺邻二甲氧嘧啶 Y=2593x +1542 0.9935 2~200 计算其他9种磺胺类药物在不同基质间的差异在 磺胺二甲嘧啶选取其中1批猪肉，使用国标方法和20%以内。 2.4 方法学验证 2.4.1 方法的线性范围及检出限 称取猪肉阴性样品加入混合标准溶液容液，按1.2.2进行前处理，结果表明，10种磺胺类药物在质量农度范围内均呈现良好的线性关系，R'均大于0.99，以3倍信噪比计算检出限(LOD))，10倍信噪比计算定量限(LOQ)结果见表3。方法检出限以及定量限均低于已有文献的报道2791。 2.4.2 方法回收率以及精密度 称取猪肉阴性样品加入混合标准溶液容量，按1.2.2进行前处理，进行回收率和精密度实验。10种磺胺类药物的添加量分别为10、50、250 pg/kg每个浓度水平作6个加标实验，使用基质标匹配，考察其回收率以及精密度。结果表明使用基质匹配标准曲线，能够有效的降低基质效应获得了良好的回收率和精密度，平均回收率在89.4%~111.0%之间，精密度在0.8%~4.9%之间结果见表4. 2.5 实际样品分析 利用该方法对兰州市场销售的500批次畜禽肉、牛奶和鸡蛋进行检验，共有11批猪肉样品检出 本方法同时检测，结果见表5，GB/T 21316-2007检出限较高，结果为未检出，农业部1025号公告-23-2008和本试验方法检测值的相对误差为7.5%该方法简化了国标的前处理方法，操作简单，灵敏度高，适用于动物源食品中磺胺类药物的检测。 3结论 本实验采用组织研磨-QuEChERS 技术结合三重四极杆液质联用仪，对动物源性食品中的磺胺类药物进行分析检测，方法可行。使用组织研磨仪能够有效提取目标化合合，具有高通量、重复性好、方法回收率高、节约体力等特点，通过基质效应分析，适用于动物源性食品中磺胺的检测。动物源性食品基质复杂组织研磨-QuEChERS 技术在检测低浓度样品时(低于50 pg/kg) 有明显的基质效益，今后的研究应深入探寻化合物组成与基质效应的关系，部分药物浓度由低到高，其基质效益由基质增强变为基质抑制初步推测可能和药物性质有关，有待进一步研究。 ( 参考文献 ) ( [1]王金金钥杨毅青等.动物食品氟喹诺酮类药残检测国 ) 表4 猪肉中10种磺胺类药物的加标回收率和相对标准偏差(n=6) Table 4 Recoveries and relative standard deviations( RSDs) of 10 sulfonamides in pork(n=6) 化合物 添加量(10 ug/kg) 添加量(50 ug/kg) 添加量(250 ug/kg) 回收率(%) RSD(%) 回收率(%) RSD(%) 回收率(%) RSD(%) 甲氧苄啶 105.2 2.4 95.2 3.6 96.4 2.6 磺胺嘧啶 105.1 3.7 104.5 1.9 105.6 3.4 磺胺甲嘧啶 99.1 3.6 111.0 0.8 94.6 2.9 磺胺二甲嘧啶 97.1 1.9 106.2 2.9 98.6 4.2 磺胺间甲氧嘧啶 99.4 2.5 89.8 3.5 97.6 3.9 磺胺氯哒嗪 101.5 2.7 110.9 3.6 93.5 4.1 磺胺间二甲氧嘧啶 96.2 2.5 102.8 3.9 105.9 3.7 磺胺甲恶唑 106.4 3.7 105.9 2.4 96.9 3.5 磺胺喹沙啉 98.9 4.7 99.9 4.8 89.4 4.9 磺胺邻二甲氧嘧啶 104.4 3.9 107.8 2.8 97.6 3.5 表5本实验方法与其他测定肉类食品中磺胺类药物方法的比较 Table 5(Comparison of this method with other methods for the determination of SAs in meat product 化合物 检验方法 检出限 测定值 前处理时间 参考文献 (pg/kg) (pg/kg) 磺胺二甲嘧啶 农业部1025号公告-23-2008 0.5 3.33 2~3h [26] GB/T21316-2007 50 未检出 2~3h [271 本试验方法 0.2 3.09 20 min 一 .内外研究现状[J].食品研究与开发201435(16)：121-125. 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All rights reserved http：//www.cnki.net 食品工业科技2020年第10期分析检测部分，发表了兰州市食品药品检验所张虹艳、邱国玉等老师的研究文章，此项研究使用SPEX高通量组织研磨仪建立了新的磺胺类药物残留的分析检测方法。   概述建立起组织研磨－QuEChERS－高效液相色谱－串联质谱法测定动物源食品中磺胺类药物残留的分析检测方法。样品用 EDTA 缓冲液溶解后，通过组织研磨仪高速处理样品，以乙腈提取目标化合物，经 Bond QuEChERS 提取、QuEChERS EMR－Lipid 净化，使用三重四极杆液质联用仪进行分析。C18色谱柱分离，0.1% 甲酸－乙腈梯度洗脱，外标法定量。结果表明，10 种磺胺在一定浓度范围内线性关系良好，决定系数( R2) 均大于 0.99，目标化合物检出限( S/N = 3) 为0.2 μg / kg，定量限( S /N = 10) 为 0.5 μg / kg。方法平均回收率为 89.4% ～111.0% ，相对标准偏差( n = 6) 为 0.8% ～4.9% ，该方法操作简单，回收率高，适用于动物源食品中磺胺类药物残留的测定。低质量浓度的磺胺类药物在猪肉、牛奶、鸡蛋中均存在明显基质效应，采用基质匹配标准曲线校正法可以对基质效应产生的影响进行补偿与消除。此实验以猪肉、牛奶、鸡蛋为研究对象，采用组织研磨仪－QuEChERS－三重四极杆液质联用仪，对动物源性食品中磺胺类兽药残留进行研究。组织研磨仪采用上下垂直高速振荡模式。本文作者还讨论研究了不同条件下，组织研磨仪对磺胺类药物提取效果的影响，并探索猪肉、鸡蛋、牛奶三种动物源性食品的基质效应，为优化兽药残留检测方法、提高兽药残留检测技术提供数据支持和理论依据。   研磨条件优化传统的涡旋振荡提取方式，动能低，样品均匀性无法得到保证，导致实验结果重现性不好。为了使得样品研磨更加均匀、充分，样品重复性好，保证样品的重现性、有效性、可比性，组织研磨仪可设置研磨时间、研磨速率，保证每次研磨条件的一致性。分别设置不同研磨速率以及研磨时间，对比10 种磺胺类药物的回收率，确定最优研磨速率以及研磨时间。以猪肉为实验对象，添加混合标准溶液100 μL( 见1.2.1) ， 10 种磺胺类药物的添加量为50 μg /kg。设定研磨速率为1000 r /min，研磨时间分别为0.5、1、1.5、2、3 min，其余步骤按1.2.2 进行样品前处理，每个样品平行测定3 次，外标法定量。结果见图2，随着研磨从0.5 min 逐渐升至3 min，10 种磺胺类药物的平均回收率呈现逐渐增大再回落的趋势，研磨时间为2 min 时，10 种磺胺类药物的平均回收率最高，研磨时间为3 min 时， 10 种磺胺类药物的平均回收率略有降低。因为动物组织随着研磨时间增长，细胞破碎越充分，细胞内蛋白质等物质大量释放，不利于磺胺类药物的提取。图2 不同研磨时间对10 种磺胺类药物回收率的影响设定研磨时间为2 min，研磨速率分别为500、800、1000、1200、1400、1600 r /min ( 最大速率1750 r /min) ，其余步骤按1.2.2 进行样品前处理，每个样品平行测定3 次，外标法定量。猪肉在不同研磨速率下均可研磨呈肉糜状，猪肉提取液随着研磨速率升高，组织破碎越细腻均匀，颜色越浅，结果见图3。研磨速率从500 r /min 提高至1600 r /min 时，10 种磺胺类药物回收率呈现整体缓慢增大之后保持平稳的趋势。研磨速率提高至1000 r /min 时， 10 种磺胺类药物的平均回收率最高，研磨速率从1000 r /min提高至1600 r /min，回收率维持在稳定水平，说明当研磨速率提升至1000 r /min 时，猪肉组织已研磨均匀，猪肉组织达到平衡状态，因此选择1000 r /min 作为最适宜研磨速，如图3 所示。图3 不同研磨速率对10 种磺胺类药物回收率的影响感谢张虹艳等老师们对垂直高速振荡模式组织研磨的认可，美国SPEX SamplePrep 公司1954年成立至今，一直致力于向市场提供最专业、最实用的前处理仪器，是冷冻研磨、垂直振荡高通量动植物组织研磨、∞式三维高能球磨等前处理方式的发明者。SPEX高通量组织研磨仪采用上下垂直高速振荡模式，可以促进细胞快速破碎、细胞裂解、组织匀浆，使得样品研磨更加均匀、充分，样品重复性好，样品之间没有交叉污染，同时节省了时间和人力成本的消耗，是一种高通量高速率高效的样品前处理技术。欲下载文章全文，请与我们联系。高通量组织研磨仪超高通量：一次可处理576个样品或16个50mL样品瓶超高效率：垂直振荡专利技术，1-2min完成困难样品研磨、均质高均一性：批量处理样品，程序化处理机制，均一性、重复性更好更人性化：可调角度彩色触摸显示屏，可编辑、调用、存储500种方法适用性广：程序可调，更多研磨瓶、研磨介质可供选择，完美契合不同样品研磨、混匀需求安全可靠：双重门锁，研磨过程更安全；设置保密程序，限制查看特定方法低温研磨：专业Kryo-Tech低温组件及可调循环程序，维持研磨全过程低温，适合温度敏感型样品