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ApplicationNews用户服务热线电话: 800-810-0439第一版发行日:2021年3月400-650-0439 ApplicationNews 超临界流体色谱分析仪 NexeraTM UC Prep 提高药物组分纯化工作的效率、缩短纯化时间、干燥时间、降低溶媒成本 01-00134-CN 中岛康介 方法优势 相对于常规 HPLC制备而言, UC 制备可大大降低干燥纯化的人力成本。 可连续处理大批量样品,缩短纯化时间。 可降低纯化操作中大量使用的有机溶剂消耗,降低耗材费用。 简介 HPLC 制备在制药领域中被用于各种目标物的分析,例如合成化合物的纯化,杂质结构分析的纯化等。但此方法处理大量粗样品的纯化和回收液的干燥需要大量时间。此外,使用 HPLC制备进行纯化会使用大量溶剂,因此购买和废弃溶剂所需的费用成为实验必须考虑的因素。本文介绍了使用超临界流体色谱制备仪“Nexera UC Prep”, 通过与 HPLC制备的比对,展示其在提升制备和纯化工作效率的案例。 |使用HPLC制备纯化2种药物组分的案例 众所周知,通通情况下采用 HPLC 反相分离模式应对多种化合物,分离性能较好。但大多数情况下会使用水作为流动相,因此干燥样品回收溶液需要大量时间。 使用 HPLC制备纯化2种药物组分的案例如下所示(表1、图1)。本文研讨了分别通过超临界流体色谱分析法与利用常规HPLC制备纯化的化合物的差异,以提升 UC纯化工作流程。 色谱柱 Shim-packTM Scepter C18-120 (50 mm×20 mm I.D., 5 um) 流动相 : AA:水(含0.1%(v/v) 的甲酸) B:乙青 流速 20 mL/min 时间程序 : B浓度10%(0-1 min)→90%(7-9min) →10%(9.01-10 min) 柱温 :3室温 进样量 ::500uL乙腈(每种化合物合10 mg/mL) 样品瓶 10mL螺旋瓶” 检测 : PDA 250 nm *1 P/N: 227-31102-01 *2 P/N: 18 091306-1(岛津GLC) 图1使用分取 HPLC 的药物分取色谱图 利用 SFC 纯化的优点 超临界流体色谱分析法 (Supercritical Fluid Chromatography,SFC) 是使用超临界流体作为流动相的色谱分析法的总称,特别是使用二氧化碳的方法广为人知。 多数情况下,二氧化碳比常规有机溶剂价格更低,可减少溶剂费用。此外,二氧化碳在大气压下回收时会自然气化,还可缩短溶液干燥回收所需的时间。 通过梯度分析确认保留 在 SFC 中,为调整化合物在色谱柱的保留力和保留时间, 会使用少量有机溶剂(改性剂),通过梯度分析,改变改性剂的添加量,可调整各化合物的保留。表2和图2所示为通过梯度分析纯化2种药物组分的条件和结果。通过使用 Shim-pack UCDiol II分析色谱柱,确认各目标组分已获得良好分离,可进行制备与纯化。 表2制备条件(SFC、梯度分析) 色谱柱 Shim-pack UC DiolI’ (250mm×20 mm I.D., 5 pm) 流动相 A: CO. B:甲醇 流速 60 mL/min 时间程序 B conc.0 %(0-1 min)→40%(7-9 min)→0% (9.01-10min) 柱温 40°℃ 进样量 500 uL n-庚烷/IPA=2:1(每种化合物含10 mg/mL) 样品瓶 10mL螺旋瓶 BPR 参数 10 MPa 检测 PDA 250 nm *3 P/N: 227-32606-04 图2使用分取 SFC 的药物分取色谱图 利用重叠进样方式,进行批量纯化处理 重叠进样是一种连续对色谱柱注入样品的方法,可充分利用从进样到分离出首个色谱峰的等待时间,提高制备效率。(参照:应用报告 C190-0502)本文研讨了通过使用重叠进样,缩短纯化时间和削减溶剂消耗量。 重叠进样时,会在分析过程中连续注入样品,因此在分析中采用不改变流动相组分比例的等度模式。结合梯度模式下化合物溶出时改性剂浓度为30%(图2),将等度模式的分析条件制定为改性剂浓度30%(表3)。根据图2制备色谱图设置5次重叠进样(图3、图4、图5)。 表3分取条件(SFC、等度分析) 色谱柱 Shim-pack UC DiolⅡI (250mm×20 mm I.D., 5um) 流动相 :A: CO, B: 甲醇 流速 :60 mL/min 时间程序 B浓度30% (0-4 min) 图4利用专用软件*设定重叠进样 *4 Prep Solution: 简化 Nexera UC Prep 操作的软件。通过图形化用户界面可设定装置参数、实施分取、分析数据。 图5利用重叠进样制备粗样品的色谱图 与常规 HPLC制备比较,更节约溶剂和样品干燥时间 分别使用 SFC 和 HPLC 纯化本试验中的目标粗样品,并比较了所消耗的溶剂量和处理时间(表4)。已知常规HPLC制备使用大量超纯水或有机溶媒作为流动相。而 SFC 制备则使用比有机溶剂量价格低的二氧化碳作为主要流动相,因此降低了有机溶剂量的消耗。此外,通过重叠进样,连续处理大批量粗样品,进一步降低了溶剂消耗量和分析时间。 回收液干燥时间的比较如图6所示。SFC 制备中使用的二氧化碳会在大气压下挥发,因此回收的液量减少。此外,由于流动相中不含水,因此可将回收液的干燥时间缩短为 HPLC 制备纯化的 1/21。 表4不同制备纯化方式 (HPLC 与 SFC)溶媒消耗量、处理时间比较 流动相 体积 流动相 体积 总时间 制备型HPLC 水 630 mL 乙腈 470 mL 55 min 制备型SFC CO2 315 mL 甲醇 135 mL 7 min 图6不同制备纯化方式 (HPLC 与 SFC)回收液干燥时间比较 结论 本文介绍了使用超临界流体色谱分析仪,进行药物制备纯化和干燥的案例。使用常规 HPLC制备纯化药物化合物具有如下问题:处理时间长,劳力成本高、有机溶剂消耗大等。与此相比,SFC 制备纯化法具有多种优点,不仅适用于新化合物的分析,还可应用于常规化合物的纯化,提高其工作效率。 岛津应用云 ( 免责声明: ) ( *本资料未经许可不得擅自修改、转载、销售; ) 岛津企业管理(中国)有限公司岛津(香港)有限公司 ( http://www.shimadzu.com.cn ) HPLC制备在制药领域中被用于各种目的,例如合成化合物的纯化,杂质结构分析所需的纯化等。另一方面,大量粗样品的纯化和回收液的干燥需要大量时间。此外,使用HPLC制备进行纯化会使用大量溶剂,因此购买和废弃溶剂所需的费用成为实验必须考虑的因素。本文介绍了使用超临界流体色谱分析仪,进行药物制备纯化和干燥的案例。使用常规HPLC制备纯化药物化合物具有如下问题:处理时间长,劳力成本高、有机溶剂消耗大等。与此相比,SFC制备纯化法具有多种优点,不仅适用于新化合物的分析,还可应用于常规化合物的纯化,提高其工作效率。
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岛津企业管理(中国)有限公司为您提供《药物中组分纯化检测方案(液相色谱仪)》,该方案主要用于其他中含量测定检测,参考标准《暂无》,《药物中组分纯化检测方案(液相色谱仪)》用到的仪器有Nexera GPC 系统。
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