动物性食品中雌二醇、雌三醇、炔雌酮和雌酮检测方案(气质联用仪)

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SSL-CA20-606Excellence in Science Excellence in ScienceGCMS-413 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.-Analytical Applications CenterTel：86(21)34193996Email： sshzyan@shimadzu.com.cnhttp：//www.shimadzu.com.cn GCMS法测定动物性食品中173-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮的残留量 GCMS-413 摘要：本文使用岛津 GCMS-QP2020 NX 气相色谱质谱联用仪建立了动物性食品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮的残留量的检测方法。结果表明：在10~1000 ng/mL浓度范围内各组分线性关系良好，各组分相关系数均达到0.999以上，方法检出限在 0.176~0.984 ng/mL。取浓度为 10 ng/mL标准品溶液连续进样6针，峰面积 RSD 均小于4.1%。加标量为 20.0 ug/kg 时的加标回收率在 84%~111%之间。本方法参考《食品安全国家标准动物性食品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮残留量的测定气相色谱-质谱法报批稿》，可为动物性食品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮残留量的测定提供参考。 关键词：气相色谱质谱联用仪动物性食品类固醇激素类药物 类固醇激素具有强且持久的蛋白同化作用，可以促进动物超常态生长，大幅提高动物养殖经济效益，在养殖业中被大量使用。滥用该类激素会造成其在动物组织中不同程度的残留，导致机体代谢紊乱、发育异常或潜在致癌、致畸风险。2019年12月27日，类固醇激素被列入食品动物中禁止使用的药品及其他化合物清单。因此，加强检测动物性食品中类固醇激素的残留，控制其滥用就显得极为重要。 实验部分 1.1仪器 GCMS-QP2020 NX气质联用仪 1.2分析条件 色谱柱： SH-Rxi-5Sil MS (30 m×0.25mm ×0.25 um)柱温程序：100℃(1 min)_20℃ /min_200℃ (3 min)_20℃ /min_260℃(5min)_20℃/min _280℃ (3min) 进样方式：不分流进样 进样量：1uL 进样口温度：220℃ 本文参考《食品安全国家标准动物性食品中173-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮残留量的测定气相色谱-质谱法报批稿》，采用岛津GCMS-QP2020 NX气相色谱质谱联用仪，建立分析动物性食品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮等类固醇激素类药物的检测方法，该方法经酶解、提取、净化和衍生步骤，灵敏度高，完全满足标准的要求。 载气控制方式：恒线速度，37.2 cm/sec 离子化方式：El 离子源温度：230℃ 接口温度：280℃ 检测器电压：调谐电压+0.3 kV 采集模式：SIM，各化合物离子信息见表1。 1.3样品前处理 图11样品前处理流程图 结果与讨论 2.1标准色谱图 待测物标准品衍生物谱图见图2，相关化合物信息见表1，质量色谱图如图3所示。 图2待测物标准品衍生物谱图(500 ng/mL) 表1 待测物化合物信息及其衍生物特征离子 No. 化合物名称 英文名称 CAS号 保留时间(min) 保留时间 (min) 定性离子 (m/z) 1 雌酮 Estrone 200-164-5 17.003 414 399、309、231 2 17β-雌二醇 17B-Estradiol 50-28-2 17.292 416 285、326、232 3 炔雌醇 Ethinylestradiol 57-63-6 18.601 425 285、440、300 4 雌三醇 Estriol 50-27-1 19.604 504 311、414、345 炔雌醇 雌三醇 图3各组分质量色谱图(10ng/mL) 2.2标准曲线 分别配制10、50、100、200、500和1000 ng/mL 的类固醇激素类药物的混合标准溶液，50℃水浴氮气吹干，加入甲苯、衍生化试剂各 100 uL，振荡混合，80℃烘箱衍生 60 min， 冷却，上机分析，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标建立标准曲线，各组分标准曲线见图4。根据最低点标样数据，以3倍信噪比(峰至峰)计算各组分方法检出限。线性相关系数和检出限见表2。 4各组分标准曲线 表2 各物质标准曲线线性系数和仪器检出限 No. 化合物名称 相关系数 仪器检出限 (ng/mL) 1 雌酮 0.9995 0.197 2 173-雌二醇 0.9996 0.176 3 炔雌醇 0.9991 0.984 4 雌三醇 0.9993 0.677 2.3重复性结果 取校准曲线最低点溶液连续进样6次，考察仪器重复性，各组分峰面积 RSD % 见表3。 表33重复性结果(n=6) No. 峰面积 化合物名称 RSD% 1 2 3 4 5 6 1 雌酮 1015 1107 1001 1065 1021 1040 3.75 2 173-雌二醇 1859 1912 1936 2013 2002 2051 3.67 3 炔雌醇 809 806 872 808 841 827 3.13 4 雌三醇 796 740 714 761 789 767 4.03 2.4加标回收率 取5g均质后的空白样品，添加待测物混合标准溶液，按照上述前处理方法处理后上机，，平行处理3份，样品加标测定结果及加标回收率结果见表4。 表4 样品加标回收率结果 No. 化合物名称 加标量 测定结果 (ug/kg) 平均回收率 (ug/kg) 1 2 3 (%) 雌酮 20.0 20.0 19.7 19.6 98.7 2 173-雌二醇 20.0 17.3 16.9 16.7 84.8 3 炔雌醇 20.0 22.9 21.4 21.8 110.2 4 雌三醇 20.0 19.3 18.3 18.5 93.5 2.5样品测试 取某超市采购的猪肝样品，均质后称取5g样品，按照1.3步骤对样品进行处理，得到样品色谱图，如图5，样品中未检测出4种类固醇激素类药物残留。 图5样品色谱图 结论 本方法采用岛津 GCMS-QP2020 NX 检测动物性食品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮的残留量，标准品衍生后溶液在 10~1000 ng/mL浓度范围内，各组分标准曲线线性良好，相关系数R均在0.999以上，方法检出限为 0.176~0.984 ng/mL。取校准曲线最低点溶液进样6针，峰面积 RSD 值均小于4.1%。在20.0 ug/kg 的空白样品加标水平下，各组分的基质加标回收率为84.8-110.2%。本方法准确、灵敏度高，能够有效的监测动物性食品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮等类固醇激素类药物的残留量。 岛津应用云 本方法采用岛津GCMS-QP2020 NX检测动物性食品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌酮和雌酮的残留量，标准品衍生后溶液在10~1000 ng/mL浓度范围内，各组分标准曲线线性良好，相关系数R均在0.999以上，方法检出限为0.176~0.984 ng/mL。取校准曲线最低点溶液进样6针，峰面积RSD值均小于4.1%。在20.0 μg /kg的空白样品加标水平下，各组分的基质加标回收率为84.8-110.2 %。本方法准确、灵敏度高，能够有效的监测动物性食品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌酮和雌酮等类固醇激素类药物的残留量。