蔬菜,水果中农药及其代谢物残留量检测方案(液相色谱仪)

智能文字提取功能测试中

thermoscientific热线8008105118电话4006505118www.thermofisher.com仅用于研究目的。不可用于诊断目的。 ◎ 2021 Thermo Fisher Scientific Inc. 保留所有权利。所有商标均为 Thermo Fisher Scientific Inc. 及其子公司的资产，除非另有指明。 赛默飞全面应对GB 23200.121-2021-植物源性食品中331种农药及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱联用法的完整解决方案 孙银彭倩牛夏梦郭藤徐牛生赛默飞世尔科技(中国)有限公司 关键词三重四极杆质谱法 GB 23200.121 QuEChERS农药残留 本文基于赛默飞液相色谱-串联三重四极杆质谱平台，建立了针对常见植物源性食品中375种农药的超高效液相色谱串联三重四极杆质谱分析方法。方法选用Acclaim Vanquish C18色谱柱(150x2.1mm， 2.2um)，以甲醇-水(均含0.1%甲酸，2.5mM甲酸铵)为流动相进行梯度洗脱，流速0.3 mL/min， 柱温40℃。采用ESI源， 正负模式同时采集，扫描方式为选择反应检测(SRM)。 结果表明：在基质标曲条件下，375种农药在2.5-100 ng/mL的范围内的线性相关系数均大于0.99；采用该方法对黄瓜、番茄、芸豆、玉米粉和红茶等基质样品进行分析，灵敏度和重现性结果良好，适用于果蔬，谷物以及茶叶等植物源性食品基质农药残留的检测。 1.引言 2021年3月，国家卫生健康委员会、农业农村部、国家市场监督管理总局联合发布GB 23200.121-2021《植物源性食品中331种农药及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱联用法》，该标准采用QuEChERS前处理方法及LC/MS/MS检测方法。相较于之前的NY/T761和GB/T 20769等检测方法，新标准的最大特色在于它充分引入了QuECHERS前处理方法，大大简化了实验前处理流程，提高了分析效率。新推出的GB23200.121-2021法和2018年推出的GB 23200.113-2018法双谱合璧，将成为今后质谱法多农残分析的金标准。 本文基于Thermo Scientific串联三重四极杆串联质谱平台，采用QuEChERS法对植物源性食品进行前处理。按照GB23200.121-2021规定的提取盐包对常见的食品进行盐析除水提取，提取后离心得到的上清液用标准对应的QuEChERS净化包进行净化。色谱条件以Acclaim Vanquish C18色谱柱进行分离，用甲醇-水体系(均含0.1%甲酸，2.5mM甲酸铵)作为流动相进行梯度洗脱。质谱采用ESI源，正负切换模式同时采集， SRM分段扫描检测；采用基质匹配外标法定量。所有化合物在2.5~100 ng/mL范围内呈良好线性关系，五种样品基质中375种农药均能够满足定量限的需求。该方法前处理快速高效，可重复性强，可为果蔬、谷物以及茶叶等植物源性食品中多农残的检测提供借鉴。 2.1仪器与试剂 2.1.1 Thermo ScientificTM VanquishTM Flex超高效液相色谱仪； 2.1.2Thermo ScientificTM TSQ FortisTM三重四极杆质谱仪； 表1 QuEChERS法耗材清单 类别 适用基质样品 描述 货号 QuEChERS 提取盐包：4g硫酸镁、1g氯化钠、1g柠檬酸钠、0.5g柠檬酸氢二钠 60105-333-B 蔬菜、水果、食用菌和糖料 净化管： 150mg MgSO4， 25mg PSA， 2mL 60105-219-B 净化管(色深样品)：150mg MgSO4， 25mg PSA， 2.5mg GCB， 2mL 60105-221-B 提取盐包：6g无水硫酸镁、1.5g醋酸钠 60105-335-B 谷物、油料、坚果 净化管：150mg MgSO4，50mg PSA， 50mg C18，2mL 60105-204-B 提取盐包：6g无水硫酸镁、1.5g醋酸钠 60105-335-B 茶叶和香辛料 净化管：150mg MgSO4， 50mg PSA， 50mg C18， 25mg GCB，2 mL 60105-380-B 植物油 提取盐包：4g硫酸镁、1g氯化钠、1g柠檬酸钠、0.5g柠檬酸氢二钠 60105-333-B 净化管： 150mgMgSO4， 50mg PSA， 50mg C18， 2mL 60105-204-B 2.1.4甲醇(质谱纯， 美国Thermo Fisher公司)；水(质谱纯，美国Thermo Fisher公司)；甲酸(HPLC纯， 美国Thermo Fisher公司)；甲酸铵(HPLC纯，美国Thermo Fisher公司)。 2.1.7 色谱： Acclaim Vanquish C18 2.2um 2.1x150 mm(P/N071399-V) 2.2化合物信息及溶液配制 2.1.5陶瓷均质子(P/N60105-370-B) 2.2.1375种农药化合物信息 2.1.6微孔滤膜： Titan3，17mmPTFE过滤器，0.2um(P/N 42213-NP) 表2375种农药化合物信息列表(部分) 中文名称 英文名称 CAS 分子式 精确质量数 3-羟基克百威 3-Hydroxycarbofuran 16655-82-6 CHNO， 237.1001 乙酰甲胺磷 Acephate 30560-19-1 CHNOPS 183.0119 啶虫脒 Acetamiprid 135410-20-7 C.H.CN 222.0672 甲草胺 Alachlor 15972-60-8 CHCINO， 269.1183 涕灭威 Aldicarb 116-06-3 C.HN，O，S 190.0776 涕灭威砜 Aldicarb-Sulfone 1646-88-4 CHNOS 222.0674 涕灭威亚砜 Aldicarb-Sulfoxide 1646-87-3 CHNOS 206.0725 唑嘧菌胺 Ametoctradin 865318-97-4 CHN， 275.2110 乙草胺 Acetochlor 34256-82-1 CHCINO， 269.1183 丙硫多菌灵 Albendazole 54965-21-8 CHNOS 265.0885 磺草灵 Asulam 3337-71-1 C。10NS 230.0361 莠去津 Atrazine 1912-24-9 CHCIN， 215.0938 阿维菌素B1a Avermectin B1a 65195-55-3 C8H，0 872.4922 莠灭净 Ametryn 834-12-8 C.HNS 227.1205 酰嘧磺隆 Amidosulfuron 120923-37-7 C，HNO，S， 369.0413 吲唑磺菌胺 Amisulbrom 348635-87-0 CHBrFN，OS， 464.9576 莎稗磷 Anilofos 64249-01-0 C.H，CINO，PS， 367.0233 保棉磷 Azinphos-Methyl 86-50-0 C.HNOPS， 317.0058 嘧菌酯 Azoxystrobin 131860-33-8 C，，HNO， 403.1168 苯霜灵 Benalaxyl 71626-11-4 CH2NO， 325.1678 恶虫威 Bendiocarb 22781-23-3 CH13NO， 223.0845 草除灵 Benazolin-Ethyl 25059-80-7 CH10CINO，S 271.0070 苯并烯氟菌唑 Benzovindiflupyr 1072957-71-1 C.HCFNO 397.0560 苄嘧磺隆 Bensulfuron Methyl 83055-99-6 CHNOS 410.0896 甲羧除草醚 Bifenox 42576-02-3 C.H.CI，NO， 340.9858 苯螨特 Benzoximate 29104-30-1 C18H18CINO5 363.0874 2.2.2标准品信息 表3梯度洗脱程序 2.2.2.1375种农药标准溶液单标，浓度100 pg/mL(购于阿尔塔科技)； 2.2.2.2储备液：精确吸取相应标准品溶液，用甲醇稀释配置成100 ng/mL的混合储备液； 2.2.2.3标准曲线溶液：以QuEChERS净化后的对应的植物源性食品空白基质作为溶剂，稀释成系列工作标准溶液，2.5、5.0、10、20、50和100 ng/mL， 考察仪器灵敏度、重现性和线性范围。 时间 A% B% 流速mL/min 0.0 98 2 0.3 0.5 98 2 0.3 1.0 50 50 0.3 19.0 0 100 0.3 19.1 0 100 0.4 22.4 0 100 0.4 22.5 98 2 0.4 24.9 98 2 0.3 25.0 98 2 0.3 2.3色谱条件： 2.4质谱条件： 色谱柱： Acclaim VanquishTM C18， 2.1x150mm， 2.2 um(P/N 071399-V)； 可加热电喷雾电离源(HESI)，正负离子切换扫描模式； 柱温：40℃； 扫描方式： Timed-SRM； 喷雾电压(+/-模式)：3500V； 进样量： 2uL； 离子传输管温度：325℃；鞘气压力40 arb； 辅助气压力10 arb； 流动相：A为0.1%甲酸水溶液(含2.5mM甲酸铵)；B为0.1%甲酸甲醇(含2.5mM甲酸铵)； 反吹气：1arb；离子源温度：350℃；碰撞气压力：2mTorr；选择反应监测离子对信息见表4。 梯度洗脱程序见表3 表4375种农药质谱采集参数 序号 化合物 RT (min) Polarity Precursor (m/z) Product (m/z) CE (V) Tube Lens (M) Source Fragmentation 449.1 44.68 1 Abamectin B1a 18.96 Positive 895.5 751.3 40.68 160 47.3 124.9 18.61 2 Acephate 3.44 Positive 184 142.9 10.23 60 5.0 99.0 25.99 3 Acetamiprid 4.99 Positive 223 126.0 21.03 76 5.0 148.1 20.39 4 Acetochlor 12.08 Positive 270.1 224.1 10.23 98 0.0 5 Alachlor 12.22 Positive 270.1 162.1 238.1 20.73 10.23 76 5.0 190.8 32.86 6 Albendazole 8.86 Positive 266.1 233.9 19.67 104 19.6 89.1 15.91 7 Aldicarb 5.99 Positive 208 116.0 10.23 56 1.6 86.1 14.28 8 Aldicarb-sulfone 3.96 Positive 223 148.1 10.23 87 11.4 89.1 14.13 9 Aldicarb-sulfoxide 3.80 Positive 207 132.0 10.23 78 5.0 149.1 37.56 10 Ametoctradin 14.50 Positive 276.1 176.1 35.51 79 5.0 11 Ametryn 8.33 Positive 228.1 95.9 185.9 26.07 19.02 92 16.3 218.0 23.28 12 Amidosulfuron 7.65 Positive 370 261.0 13.3 81 0.0 13 Amisulbrom 18.50 Positive 466 148.0 226.9 47.27 20.16 120 0.0 14 Anilofos 13.35 Positive 368 124.8 198.8 31.27 14.21 91 3.3 103.9 28.35 15 Atrazine 9.91 Positive 216.1 174.0 17.35 86 11.4 125.0 17.43 16 Azinphos-methyl 9.53 Positive 317.9 132.0 14.74 79 0.0 17 Azoxystrobin 9.83 Positive 404.1 343.9 371.9 25.35 14.74 85 0.0 序号 化合物 RT (min) Polarity Precursor (m/z) Product (m/z) CE Tube Lens (M) Source Fragmentation 195.0 25.65 381 Triflumizole metabolite 5.44 Positive 295.1 215.0 22.65 96 11.4 111.0 52.74 382 Triflumuron 14.08 Positive 359 138.9 30.74 76 5.0 264.0 20.16 383 Triflusulfuron-methyl 10.52 Positive 493.1 460.6 12.33 85 0.0 70.1 18.4 384 Triticonazole 13.00 Positive 318.1 125.1 33.9 84 3.3 195.1 18.27 385 Tritosulfuron 10.00 Positive 446.1 221.0 17.85 100 6.5 70.0 386 Uniconazole 15.00 Positive 292.1 124.9 24.18 29.33 97 13.1 117.9 22.36 387 Vamidothion 4.68 Positive 288 146.1 11.74 70 5.0 58.0 31.27 388 Vamidothion-sulfone 3.96 Positive 319.9 178.0 14.81 76 5.0 108.9 29.07 389 Vamidothion-sulfoxide 3.79 Positive 304 200.9 12.69 83 5.0 390* Zoxamide 13.74 Positive 336 186.9 204.0 21.75 12.34 57 5.0 2.5样品前处理 2.5.1蔬菜、水果、食用菌和糖料 称取10 g试样(精确至0.01 g)于50mL塑料离心管中，加入10 mL乙腈及1颗陶瓷均质子，剧烈震荡1 min， 加入4 g无水硫酸镁、1g氯化钠、1g柠檬酸钠、0.5g柠檬酸氢二钠(P/N 60105-333-B)，剧烈震荡1 min后4200 r/min离心5 min。吸取1mL上清液至内含150 mg无水硫酸镁、25 mg PSA的2mL塑料离心管中(P/N60105-219-B)；对于颜色较深的试样，离心管中另加入2.5 mg GCB(P/N 60105-221-B)，涡旋混匀1 min。4200 r/min离心5 min， 吸取上清液过微孔滤膜，待测定。 注：对于干制蔬菜、水果和食用菌，称取1g试样(精确至0.01g)于50mL塑料离心管中，加9 mL水涡旋混匀，静置30 min后按上述方式处理。 2.5.2谷物、油料和坚果 称取5g试样(精确至0.01 g)于50mL塑料离心管中，加10 mL水涡旋混匀，静置30 min。加入15 mL 乙腈-醋酸溶液及1颗陶瓷均质子，剧烈震荡1 min， 加入6 g无水硫酸镁、1.5g醋酸钠(P/N60105-335-B)，剧烈震荡1 min后4200 r/min离心5 min。吸取1mL上清液至内含150 mg无水硫酸镁、50 mg C18和50 mg PSA的2mL塑料离心管中(P/N 60105-204-B)，涡旋混匀1 min。4200 r/min离心5 min，吸取上清液过微孔滤膜，待测定。 2.5.3茶叶和香辛料 称取2g试样(精确至0.01g)于50mL塑料离心管中，加10mL水涡旋混匀，静置30 min。加入15 mL 乙腈-醋酸溶液及1颗陶瓷均质子，剧烈震荡1 min， 加入6 g无水硫酸镁、1.5g醋酸钠(P/N 60105-335-B)，剧烈震荡1 min后4200 r/min离心5 min。吸取1mL上清液至内含150mg无水硫酸镁、50 mg C18、50 mg PSA 和25 mg GCB的2mL塑料离心管中(P/N 60105-380-B)，涡旋混匀1 min。4200 r/min离心5min，吸取上清液过微孔滤膜，待测定。 2.5.4植物油 称取2g试样(精确至0.01g)于50mL塑料离心管中，加入5 mL水。加入10 mL乙腈及1颗陶瓷均质子，剧烈震荡1min，加入4 g无水硫酸镁、1g氯化钠、1g柠檬酸钠、0.5 g柠檬酸氢二钠(P/N60105-333-B)，剧烈震荡1 min后4200 r/min离心5 min。吸取1mL上清液至内含150 mg无水硫酸镁、50 mg C18和50 mg PSA的2mL塑料离心管中(P/N 60105-204-B)，涡旋混匀1 min。4200 r/min离心5 min， 吸取上清液过微孔滤膜，待测定。 注：测定蔬菜、水果、食用菌、糖料、植物油中磺酰脲类除草剂、环己烯酮类除草剂(烯草酮、烯草酮砜、烯草酮亚砜、噻草酮、三甲苯草酮、烯禾啶)、三唑并嘧啶磺酰胺类除草剂(双氟磺草胺、唑嘧磺草胺、五氟磺草胺)、氟啶胺、螺虫乙酯及其代谢物、甲磺草胺、苯嘧磺草胺、苯噻隆、氰霜唑代谢物CCIM和异噁唑草酮-二酮腈时， PSA的用量降低至每毫升提取液5 mg (P/N60105-381-B/60105-382-B)，谷物、油料、坚果降低至每毫升提取液10 mg (P/N 60105-383-B)。 3.1快速定量筛查方法的建立 基于Trace Finder 软件强大的农药残留数据库功能，t可以通过GB23200.121方法包中提供的仪器采集方法，或者XML格式的方法文件，在质谱模块TSQ下拉菜单导入Mass list XML格式的农残化合物信息列表，可快速建立植物源性基质多农残的定量筛查采集方法。包含全部375种农药化合物保留时间、离子对(母离子和子离子)、Lens电压和碰撞能量等一系列质谱参数(如图2所示)，无需手动输入化合物的信息，使用方便，既节约大量的工作时间，也避免手动输入引起的错误。利用赛默飞三重四极杆快速高效扫描功能(600 SRM /s)， 采用Timed-SRM模式，可实现对植物源性食品中多农残进行高通量的采集。 图1.375种农药化合物数据库信息 图2.375种农药化合物仪器采集方法 3.2色谱图 本方法基于赛默飞QuEChERS提取盐包以及净化盐包对五种植物源性样品进行前处理，在TSQ Fortis上一针进样，正负模式同时 采集，可在20 min内轻松实现对植物源性食品中375种农药的筛查和确证可大大节省人力和物力成本。对称且尖锐的色谱峰表明待测农药组分在保留时间窗口内均可以实现高效的色谱分离效果(如图3)。 图3黄瓜基质中375种农药的TIC图(5.0 ng/mL) 采用2.3及2.4的仪器采集方法，可以在确定农药种类的同时对样品中含有的农药残留进行定量分析。色谱-质谱联用技术对于复杂基质中待测组分的检测过程中，由于样品基质引起的基质效应非常普遍，通常气质表现为基质效应增强，液质则表现为基质效应抑制。本文通过五种植物源性样品空白基质，进样浓度在2.5-200 ng/mL的 范围内的7个校准级别的标准品得到校正曲线，分别对五种植物源性样品中的农药残留进行定量分析。结果表明在基质标曲条件下，待测所有的农残组分的线性相关系数R?均大于0.99，线性关系良好(表4)。方法中375种农残的定量限均可以达到GB23200.121中规定的五种基质对应的定量限要求，能够满足常规多农残留检测的需求。在定量限条件下，所有测定农残化合物均能获得良好的谱图效果(图4)，可实现准确定量定性分析。 表4黄瓜基质中375种农药的标曲范围、相关系数等参数(部分) 19 Epoxiconazole 2.5-100 ng/mL Y=1.177e4*X+1.63e4 0.9997 Cyanazine 2.5-100 ng/mL Y=1.18e4*X-6.035e3 0.9988 20 letraconazole 2.5-100 ng/mL Y=8.829e3*X-5.514e3 0.9995 21 Penflufen 2.5-100 ng/mL Y=4.559e4*X-5.81e2 1.0000 22 Diclobutrazol 2.5-100 ng/mL Y=7.84e3*X+4.998e3 0.9999 23 Chlorbenzuron 2.5-100 ng/mL Y=1.154e4*X+3.982e3 0.9999 24 Haloxyfop 2.5-100 ng/mL Y=2.664e3*X+1.128e3 0.9985 25 Fipronil sulfoxide 2.5-100 ng/mL Y=9.539e2*X+9.117e2 0.9967 26 Azoxystrobin 2.5-100 ng/mL Y=3.893e4*X-1.42e4 0.9988 Tebuconazole 2.5-100 ng/mL Y=7.067e3*X+9.656e3 0.9978 8 Fluazifop 2.5-100 ng/mL Y=4.214e3*X-2.744e3 0.9997 9 Boscalid 2.5-100 ng/mL Y=8.379e3*X-2.792e3 0.9999 10 Mevinphos 2.5-100 ng/mL Y=4.627e4*X-6.049e4 0.9989 11 Promecarb 2.5-100 ng/mL_ Y=3.936e4*X-3.26e4 0.9997 12 13 Dimethomorph 2.5-100 ng/mL Y=1.692e4*X+1.833e4 0.9990 14 Fluopicolide 2.5-100 ng/mL Y=1.449e4*X+5.308e3 0.9992 15 Fluxapyroxad 2.5-100 ng/mL Y=1.941e4*X+1.095e4 0.9998 16 Bromuconazole trans 2.5-100 ng/mL_ Y=2.152e3*X+2.088e3 0.9997 17 图4基质曲线5.0 ng/mL浓度下部分化合物的定量定性离子叠图 分别在五种样品基质的定量限添加水平下进行了加标回收率的的测试，考查了赛默飞三重四级杆平台对375种农药的稳定性。结果表明，除了茶叶以外(86.4%)，其他四种样品基质90%以上的农残均可以实现回收率在70-120%之间，表5汇总了部分化合物的加标 回收率和精密度结果。采用标准中规定的QuEChERS前处理方法可能会导致部分农药出现回收率偏低的情况，可通过如下的一些方法来解决：：一一是按标准的要求对净化管中相关填料的比例进行调整来进行前处理；而对于一些基质比较干净的样品，也可以不用净化，待QuEChERS提取过程完成后，直接取适量的有机相上机检测，这样可以避免净化过程中由于填料的吸附引起的回收率低的情况。 表5五种植物源性基质在定量限水平下部分化合物的回收率及精密度(n=6) 化合物名称 茶叶 玉米粉 黄瓜 豆角 番茄 回收率 RSD 回收率 RSD 回收率 RSD 回收率 RSD 回收率 RSD (%) (%) (%) (%) (%) (%) (%) (%) (%) (%) 阿维菌素 115.9 6.48 82.2 2.91 82.5 8.49 101.6 7.12 95.9 9.22 啶虫脒 94.5 2.67 108.7 2.32 87.6 6.58 77.8 4.18 94.3 3.76 甲草胺 100.9 1.99 90.0 7.46 107.2 6.21 100.6 4.17 90.1 2.43 涕灭威砜 83.5 5.48 107.2 1.73 99.0 2.14 99.4 3.56 93.2 7.14 吡唑醚菌酯 95.1 5.66 87.0 2.57 91.3 4.69 96.6 3.89 98.3 4.78 苯霜灵 87.3 3.34 101.6 3.00 95.9 3.62 96.3 5.77 101.1 3.55 恶虫威 84.5 3.69 88.7 3.96 102.4 2.69 108.2 7.31 96.1 2.35 苯螨特 82.0 5.08 98.8 5.15 107.6 2.44 87.0 5.36 82.0 4.46 生物苄呋菊酯 90.9 1.77 84.9 2.03 81.0 4.17 109.1 1.75 85.7 2.03 联苯三唑醇 84.1 6.19 76.2 1.80 68.1 8.89 122.8 5.65 108.8 9.25 啶酰菌胺 87.6 2.70 75.8 3.37 82.2 5.69 93.5 8.76 88.0 8.96 甲萘威 92.3 5.35 97.2 6.50 89.5 6.48 108.8 9.17 102.8 2.98 克百威 88.8 6.73 116.8 1.69 105.8 4.07 103.3 7.05 109.3 4.29 氟啶脲 89.0 5.03 93.8 2.54 113.6 8.44 77.3 8.27 105.9 7.69 毒死蜱 88.8 4.70 88.9 3.69 113.2 6.17 98.7 5.34 103.5 1.99 绿麦隆 82.3 3.32 96.9 2.13 94.3 8.07 101.6 0.92 97.9 1.34 蝇毒磷 86.9 4.94 95.8 0.97 84.4 5.48 99.5 5.86 104.4 2.92 氰草津 87.2 1.88 96.4 2.01 96.1 3.61 106.7 4.00 94.0 5.59 氰霜唑 101.3 5.51 83.1 2.71 74.0 5.18 109.1 1.77 102.6 5.48 噻草酮 96.1 6.72 100.1 0.65 79.5 2.61 90.2 9.52 113.5 3.77 甲基内吸磷 98.3 5.23 73.5 3.50 113.5 6.90 92.7 1.63 85.4 异丙威 105.7 3.18 86.4 2.42 95.1 6.18 103.8 1.59 103.7 2.17 利谷隆 85.9 3.65 99.7 2.71 91.1 8.44 99.6 6.14 101.6 6.92 甲霜灵 102.0 1.60 100.6 3.74 85.9 5.02 91.8 8.03 89.3 4.78 异丙甲草胺 112.2 2.64 85.8 1.59 95.9 3.63 88.4 1.62 100.5 1.48 速灭威 112.8 5.53 95.5 4.72 96.3 6.73 100.4 5.60 95.4 4.63 速灭磷 104.0 3.70 92.5 3.07 84.3 2.97 85.3 5.32 96.3 5.48 久效磷 101.7 4.08 93.9 2.10 92.6 1.27 86.4 4.30 105.2 3.69 亚砜磷 86.9 4.21 83.2 1.41 111.6 3.49 85.3 2.11 92.0 0.76 戊菌唑 95.3 1.01 86.9 2.53 95.0 7.58 104.9 4.76 85.6 8.73 本文基于赛默飞液相色谱-串联三重四极杆质谱平台，建立了针对常见植物源性食品中375种农药的超高效液相色谱串联三重四极杆质谱分析方法。方法选用Acclaim Vanquish C18色谱柱（150x2.1mm, 2.2m），以甲醇-水（均含0.1%甲酸，2.5 mM甲酸铵）为流动相进行梯度洗脱，流速0.3 mL/min，柱温40 ℃。采用ESI源，正负模式同时采集，扫描方式为选择反应检测（SRM）。