中药丹参中33种农残检测方案

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不稳定之王一中药丹参的33种农残测定分析 背景 丹参为唇形科鼠尾草属多年生草本植物，其药用部位为干燥根以及根茎。长期以来，丹参以其广泛的药理活性为医药界做出了巨大的贡献。走访中药检测机构，普遍抱怨丹参的农残测定非常的不稳定，这个主要是由于丹参药材含有大量的菲醌类化合物，这些成分特别容易造成有机磷类化合物降解，从而导致目标物线性差、回收率低、甚至丢峰。GCMSMS 分析中由于基质复杂及易导致甲基对硫磷、对硫磷、甲基硫环磷等化合物拖尾，峰形变差， LCMSMS 分析中内吸磷、甲拌磷、涕灭威经常丢峰，药典规定的四种前处理方法都不能很好的使有机磷类农药化合物更稳定。纳谱分析近期针对丹参样品分析存在的问题，调整填料比例，特别推出 SelectCore QuEChERS Pesticide Residue A07(丹参中药农残Q法)净化管，处理后的丹参样品溶液，溶液稳定性好，农残回收率数据重现性良好。 丹参 适用范围 本方法参考中国药典2020版2341 第五法中的快速样品处理法(QuEChERS) 法。实验步骤 1 对照品溶液的制备 1.1 混合对照品配制 精密量取禁用农药混合1mL， 置20mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用； 1.2气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备 取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每1mL 含 1.0mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每 1mL 含 0.1ug的溶液。 1.3空白基质溶液的制备 取丹参空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。 1.4基质混合对照溶液的制备 分别精密量取空白基质溶液 1.0mL(6份)，置氮吹仪上，40℃水浴浓缩至约0.6mL， 分别加入混合对照品溶液 10pL、20pL、50pL、100pL、150pL、200pL，加乙腈稀释至1mL， 涡旋混匀，即得。 2 供试品溶液的制备 2.1提取 取供试品粉末(过三三筛)3g，精密称定，置50mL聚苯乙烯具塞离心管中，加入1%冰醋酸溶液 15mL，涡旋使药粉充分浸润，放置30分钟，精密加入乙腈15mL，涡旋使混匀，置振荡器上剧烈振荡(500次/分)5分钟，加入 SelectCore QuEChERS 萃取盐包 6g MgSO4， 1.5g NaOAc(QS-002)，立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡(500次/分)3分钟，于冰浴中冷却10分钟，离心(4000转/min)5分钟，待净化。 3 净化 SPE 净化管： SelectCore QuEChERS 净化管 15mL， Pesticide Residue A07(丹参中药农残Q法) 净化：取上述提取液上清液9mL 置上述净化管中涡旋使充分混匀，置振荡器上剧烈振荡(500次/分)5分钟使净化完全，离心(4000转/min)5分钟，即得。 GC/MS/MS测定：精密吸取上清液5mL，置氮吹仪上于35°C水浴浓缩至约0.4mL，加入混合对照品液再加乙腈稀释至1.0mL， 涡旋混匀，再加入0.3 mL 磷酸三苯酯溶液，混匀，过 0.22um尼龙针式过滤器，上机分析。 LC/MS/MS测定：精密吸取上清液5mL，置氮吹仪上于35℃水浴浓缩至约 0.4mL， 加入混合对照品液再加乙腈稀释至1.0mL，涡旋混匀，再加入0.3mL水，混匀，过 0.22um尼龙针式过滤器，上机分析。 注意事项：由于GCMSMS分析时间较长，为保证丹参分析数据的准确性， GCMSMS 分析建议先提取前加标样品，上机分析后，再处理丹参样品和空白基质溶液，待前加标样样液分析完成后即刻分析丹参样品液，待丹参样品液全部分析完成后再配制基质加标的6个浓度点设置批处理， LCMSMS 可直接设置批处理分析。 4 气相色谱-串联质谱法(岛津 GC-MS -TQ8040 NX) 色谱条件 色谱柱： SHIMADZU SH-Rxi-17Sil MS， 30mx0.25mm， 0.25um； 进样口温度：：250°C： 升温程序：初始温度为60℃，保持1min； 以10℃/min 升温至160℃；再以2℃/min 升温至230℃，最后以15℃/min 升温至300℃，保持6min； 载气：高纯氦气(纯度>99.999%)； 进样方式：：不分流进样； 恒压模式：146kPa： 进样量：：1uL。 质谱条件 电离方式：：电子轰击电离源(EI)； 电离能量：70Ev： 接口温度：250℃； 离子源温度：250℃； 监测方式：多反应检测模式(MRM)； 溶剂延迟：10.0min。 注意事项：杀虫脒参考 LCMSMS分析数据更好； 甲基对硫磷定量离子：263.10>109.00 CE： 113 参考离子：125.00>47.00 CE： 10 β-硫丹定量离子：206.80>171.80 CE：15 参考离子：194.80>159.00 CE： 10 小建议：做完丹参后建议290℃老化色谱柱2h，或截取掉色谱柱进样口端30cm 色谱柱后再进行其他样品的分析。 5 高效液相色谱-串联质谱法(岛津LC-MS 8045) 色谱条件 色谱柱： ChromCore C18-MS Pesticides 中药农残专用柱(2.1x100 mm， 2.6 um) 流动相： A：：C0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L甲酸铵) B： 乙腈-0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L甲酸铵)=95：5 流速：0.3 mL/min 柱温：40℃ 进样量： 2 pL 梯度： 时间 (min) 流速(mL/min) 流动相A(%) 流动相B(%) 0 0.3 70 30 1 0.3 70 30 12 0.3 0 100 14 0.3 0 100 14.1 0.3 70 30 16 0.3 70 30 质谱条件 离子源：电喷雾离子源(Electrospray ionization， ESI) 正离子扫描 监测方式：多反应监测(Multiple Reaction Monitoring， MRM) 离子源接口电压：4.5kV 雾化气：氮气3.0L/min 加热气： 干燥空气 10.0L/min DL 温度：250℃ 加热模块温度：400℃ 接口温度：300℃ 干燥气： N2 10 L/min 小建议：做完丹参样品分析后，建议清洗离子源后再进行其他样品的分析。 表1 丹参中33种农药残留的的测定添加回收结果(%) 农残成分 回收率 农残成分 回收率 农残成分 回收率 甲胺磷 72.5% 地虫硫磷 89.1% 涕灭威砜 76.4% 甲基对硫磷 93.4% 硫线磷 68.5% 涕灭威亚砜 86.0% 对硫磷 94.3% 蝇毒磷 97.5% 灭线磷 90.7% 久效磷 99.9% 治螟磷 92.0% 氯唑磷 80.6% 磷胺 80.0% 特丁硫磷 88.6% 水胺硫磷 101.7% α-六六六 90.2% 特丁硫磷砜 83.6% α-硫丹 87.7% β-六六六 94.0% 特丁硫磷亚砜 85.4% β-硫丹 88.9% y-六六六 90.7% 甲基硫环磷 104.9% 硫丹硫酸酯 99.6% 8-六六六 91.3% 甲磺隆 79.0% 氟虫腈 96.0% 2，4'-滴滴涕 82.8% 氯磺隆 64.1% 氟虫腈砜 99.5% 4，4'-滴滴滴 88.8% 胺苯磺隆 86.5% 氟虫腈亚砜 98.2% 4，4'-商滴涕 86.7% 甲拌磷 87.3% 氟甲腈 95.6% 4，4'-滴滴伊 75.7% 甲拌磷砜 79.0% o，p'-三氯杀螨醇 87.1% 杀虫脒 74.1% 甲拌磷亚砜 86.3% p，p'-三氯杀螨醇 87.3% 除草醚 85.6% 甲基异柳磷 92.8% 硫环磷 87.8% 艾氏剂 79.0% 内吸磷-O 82.2% 狄氏剂 90.1% 内吸磷-S 87.1% 苯线磷 92.6% 克百威 87.0% 苯线磷砜 94.3% 3-羟基克百威 78.9% 苯线磷亚砜 89.4% 涕灭威 85.2% 6丹参固相1净化管净化和 SelectCore QuEChERS Pesticide Residue A07(丹参中药农Q法)15mL 净化 管净化易降解化合物稳定性对比 目标物 初始(回收率) 放置1h(回收率) 放置3h(回收率) 放置12h(回收率) 内吸磷-S 55% 87% 23% 85% 无峰 82% 无峰 75% 内吸磷-0 63% 82% 28% 81% 无峰 82% 无峰 72% 甲拌磷 42% 87% 34% 85% 无峰 85% 无峰 71% 苯线磷 57% 92% 46% 94% 18% 91% 无峰 85% 特丁硫磷 71% 88% 59% 88% 42% 86% 9% 74% 红色为固1净化管净化数据，黑色为A07丹参中药农残Q法净化管净化数据 7 丹参直接提取法(固1、固2净化)和 SelectCore QuEChERS Pesticide Residue A07(丹参中药农残Q法) 15mL目标物对比图 内吸磷-O(左边为固1，右边为A07丹参中药农残Q法净化管) 88.00>60.00 88.00>59.00 75- 50- 10.0 10..5 11.0 11.5 内吸磷-S(左边为固1，右边为A07 丹参中药农残Q法净化管) 甲拌磷(左边为固1，右边为A07丹参中药农残Q法净化管) 苯线磷(左边为固1，右边为A07丹参中药农残Q法净化管) 甲拌磷砜(左边为固2，右边为A07 丹参中药农残Q法净化管) 涕灭威(左边为固2，右边为A07丹参中药农残Q法净化管) 水胺硫磷(左边为固2，右边为A07丹参中药农残Q法净化管) 杀虫脒(左边为固2，右边为A07 丹参中药农残Q法净化管) 2 8实验讨论 通过以上实验数据比对，可以看出 SelectCore QuEChERS Pesticide Residue A07(丹参中药农残Q法)15mL化化管，解决了丹参中由于大量菲醌类化合物引起的有机磷农药降解过快而导致分析结果不准确的问题，经过以上方案处理后各目标物回收率、线性、峰形均较为良好，为丹参的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。 纳谱分析NanoChrom纳谱分析技术(苏洲)有限公司Phone： E-mail： customerservice@nanochrom.com Web： www.nanochrom.com 农残成分回收率农残成分回收率农残成分回收率甲胺磷72.5%地虫硫磷89.1%涕灭威砜76.4%甲基对硫磷93.4%硫线磷68.5%涕灭威亚砜86.0%对硫磷94.3%蝇毒磷97.5%灭线磷90.7%久效磷99.9%治螟磷92.0%氯唑磷80.6%磷胺80.0%特丁硫磷88.6%水胺硫磷101.7%α-六六六90.2%特丁硫磷砜83.6%α-硫丹87.7%β-六六六94.0%特丁硫磷亚砜85.4%β-硫丹88.9%γ-六六六90.7%甲基硫环磷104.9%硫丹硫酸酯99.6%δ-六六六91.3%甲磺隆79.0%氟虫腈96.0%2,4'-滴滴涕82.8%氯磺隆64.1%氟虫腈砜99.5%4,4'-滴滴滴88.8%胺苯磺隆86.5%氟虫腈亚砜98.2%4,4'-滴滴涕86.7%甲拌磷87.3%氟甲腈95.6%4,4'-滴滴伊75.7%甲拌磷砜79.0%o,p'-三氯杀螨醇87.1%杀虫脒74.1%甲拌磷亚砜86.3%p,p'-三氯杀螨醇87.3%除草醚85.6%甲基异柳磷92.8%硫环磷87.8%艾氏剂79.0%内吸磷-O82.2%狄氏剂90.1%内吸磷-S87.1%苯线磷92.6%克百威87.0%苯线磷砜94.3%3-羟基克百威78.9%苯线磷亚砜89.4%涕灭威85.2%