蜂蜜中羟甲基糠醛的含量检测方案(液相色谱仪)

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文档编号： LC-K2025-01-210604 蜂蜜中羟甲基糠醛的含量测定——高效液相色谱法 背景： 羟甲基糠醛是蜂蜜中的还原糖经加热、脱水生成的一种黑色具有难闻气味的有毒物质，其反应机理里在酸性条件下，蜂蜜中的氨基化合物与葡萄糖发生 Mailard 反应或者蜂蜜中的还原糖发生脱水反应，生成羟甲基糠醛。 新鲜蜂蜜中羟甲基糠醛的含量很低，一般不会超过 10mg/kg。但在加工和贮藏过程中其含量将逐渐增高，甚至可能超标。羟甲基糠醛的存在会严重影响到蜂蜜食用的安全性，对眼睛、黏膜或皮肤有刺激性，摄入过多会引起中毒，甚至引发癌症、造成动物横纹肌麻痹和内脏损伤。 在国际贸易中羟甲基糠醛属强检指标，要求每千克蜂蜜中羟甲基糠醛的含量应小于 40mg。各国也规定了羟甲基糠醛的最高限量，并将之作为判定是否掺有转化糖的依据。 实验部分： 仪器与试剂： 仪器与设备：悟空 K2025 高效液相色谱仪；分析天平(精确到0.0001g)；涡旋振荡器；pH计；容量瓶(10mL、1000mL，棕色带刻度)等。 试剂与材料：羟甲基糠醛标准品(CAS 号：67-47-0，纯度为99.9%)；符合 GB/T6682的一级水； 甲醇(色谱纯)；0.22um微孔滤膜(有机相)。 实验方法： 样品处理：称取10g蜂蜜蜜样(精确至0.01g)，置于100mL烧杯中，加入10mL甲醇，用玻璃棒轻轻搅拌均匀，使试样完全溶解。将上述溶液转移至100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，充分混匀。该溶液用0.22um的滤膜过虑，取续滤液待上机测定。 色谱条件： a)色谱普：C18色谱柱(4.6×250mm， 5um) b)流动相：甲甲+水(10+90) c)柱温：30℃ d)进样量：10pL e)流速：1.0mL/min f)波长：285mm 【结果与讨论】： 1.羟甲基糠醛标准溶液(浓度为2.040ug/mL)色谱图如图1所示： 图1羟甲基糠醛标准溶液色谱图 2.将羟甲基糠醛标准溶液逐级稀释至信噪比S/N 为3左右，计算仪器的检出限，数据结果见表1。经计算仪器针对羟甲基糠醛的检出限为 0.014ug/mL，定量限为0.048ug/mL. 表1灵敏度测试数据 目标物 浓度 峰高 噪声 S/N LOD LOQ (ug/mL) (mAU) (mAU) (ug/mL) (ug/mL) 羟甲基糠醛 0.102 0.601 0.028 21.5 0.014 0.048 3.将系列羟甲基糠醛标准溶液在 HPLC 上进行测定，绘制校准曲线，线性方程及相关系数见图2，曲线的相关系数R?为0.9999， 线性关系良好；系列浓度溶液色谱图如图3所示。 图2羟甲基糠醛标准溶液校准曲线 图3羟甲基糠醛系列浓度标准溶液色谱图 4.购买市售蜂蜜样品进行处理，并进行加标回收实验，样品加标回收色谱图如图4所示，羟甲基糠醛加标回收率为95.2%。 图4蜂蜜样品加标回收色谱图 【结论】 通过对羟甲基糠醛的色谱峰型、重复性、灵敏度、线性测试以及对蜂蜜样品测试，表明使用 K2025高效液相色谱仪测定蜂蜜样品中羟甲基糠醛具有良好的线性关系，确定系数 R²值为0.9999；连续进样7针，保留时间的 RSD 值为 0.031%，峰面积的RSD 值为 0.489%，定性定量均有良好的重复性；羟甲基糠醛的仪器检出限为0.014ug/mL， 定量限为0.048ug/mL， 加标回收率为95.2%。因此， Wooking K2025高效液相色谱仪完全可以满足《GB/T 18932.18-2003蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法液相色谱-紫外检测法》测定羟甲基糠醛含量的需求。 羟甲基糠醛是蜂蜜中的还原糖经加热、脱水生成的一种黑色具有难闻气味的有毒物质，其反应机理是在酸性条件下，蜂蜜中的氨基化合物与葡萄糖发生Mailard反应或者蜂蜜中的还原糖发生脱水反应，生成羟甲基糠醛。 新鲜蜂蜜中羟甲基糠醛的含量很低，一般不会超过10mg/kg。但在加工和贮藏过程中其含量将逐渐增高，甚至可能超标。羟甲基糠醛的存在会严重影响到蜂蜜食用的安全性，对眼睛、黏膜或皮肤有刺激性，摄入过多会引起中毒，甚至引发癌症、造成动物横纹肌麻痹和内脏损伤。 在国际贸易中羟甲基糠醛属强检指标，要求每千克蜂蜜中羟甲基糠醛的含量应小于40mg。各国也规定了羟甲基糠醛的最高限量，并将之作为判定是否掺有转化糖的依据。