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做GFP标记细菌时如何准备转化用的细胞原种

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准备转化用的细胞原种

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做做GFP标记细菌，如果想要成功标记，用生化培养箱准备转化用的细胞原种是个很重要的过程，下面小编就给大家罗列下准备转化用的细胞原种的过程。1. 取菌液甘油保存-80°C；2. 用接种环直接将冻存的菌种在R2A琼脂平板表面划线，在 23°C生化培养箱内培养16h；（没有必要融化冻存的细菌。当接种环在冻存菌种表面上划过时，将附着足量的细胞。一管冻存菌种可以使用很多次。如果没有生化培养箱，普通的电热恒温培养箱不能设定到23℃，可以在室温下孵育R2A平板）3. 将4或5个分开的菌落转移到含2mL R2A液体培养基的新的干净的15ml培养管中，23°C生化培养箱培养 16h。（菌落直径应该不超过2~3mm。可根据需要设置多个2mL培养物）；4. 在每份培养物中，添加无菌甘油至终浓度为 15%(V/V)；5. 分装到2.5mL 冻存管中，每管 1mL。将冻存管装入到一个塑料密封袋中，浸入干冰/乙醇浴中5min；6. 将塑料袋及其内容物转移到-80°C冰箱。

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