芹菜中咪鲜胺及其代谢物残留测定（禾信仪器LC-TQ 5200）

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前言咪鲜胺是一种广谱杀菌剂，可用于防治禾谷类作物茎、叶、穗上的许多病害，如水稻稻瘟病及白粉病、叶斑病等。咪鲜胺在环境中会先降解成n-丙基-n-[2-(2,4,6-三氯苯氧基)乙基]脲和n-醛基-n[2-(2,4,6,-三氯苯氧基)乙基]脲,最后降解成2,4,6-三氯苯酚。咪鲜胺属于低毒性杀菌剂，但其最终代谢产物可能会对环境以及人类产生长期不良影响，因此在检测咪鲜胺的同时检测2,4,6-三氯苯酚是非常有必要的。本文参考SN/T 5444-2022《出口植物源食品中咪鲜胺及其代谢产物的测定 液相色谱-质谱/质谱法》标准，使用液相色谱-串联质谱仪对芹菜中的咪鲜胺及其代谢物进行分析，通过检出限、定量限、精密度、准确度等指标评估质谱仪（禾信LC-TQ 5200）性能，证明禾信LC-TQ 5200满足芹菜中咪鲜胺及其代谢物检测的需要。实验部分样品前处理称取10 g试样，置于50 mL具塞离心管中，加入20 mL酸化乙腈、6.0 g氯化钠及1颗均质子，充分混匀后，涡旋振荡10 min，8000 r/min离心5 min，移取10 mL加入15 mL离心管（含有900 mg硫酸镁、100 mg PSA、10 mg GCB），涡旋振荡5 min，8000 r/min离心5 min，准确吸取5 mL上清液于10 mL试管中，置于氮吹仪中，35℃浓缩至近干，用2 mL乙腈复溶，涡旋1 min，取上清液过0.22 μm有机滤膜，供仪器分析。仪器条件表1. 仪器方法参数模块参数值色谱色谱柱Waters ACQUITY UPLC BEH C18（50×2.1 mm，1.7 μm）柱温35℃流动相A相：甲醇；B相：5 mmoL/L乙酸铵溶液流速0.3 mL/min进样量10 μL洗脱0~0.50 min：20%A，80%B；1.00~3.5 min：80%A，20%B；4.00~6.00 min：20%A，80%B质谱离子源ESI+和ESI-检测模式多反应监测（MRM）碰撞气（CAD）0.40 mL/min气帘气（CUR）5.0 L/min雾化气（GS1）1.20 L/min加热气（GS2）12.00 L/min喷雾电压（IS）5000V加热温度（TEM）650℃结果与讨论1、标准谱图和物质信息咪鲜胺及其代谢物标准品总离子流图见图1。目标化合物的浓度为20.0 ng/L，各目标化合物和内标出峰顺序、保留时间以及特征离子信息见表2。图1  咪鲜胺及其代谢物标准品总离子流图和MRM色谱图表2. 化合物的保留时间和特征离子信息表名 称RT，min定性离子对定量离子对碰撞能量V咪鲜胺2.59376.2/70.2376.2/308.535，16BTS445952.61327.4/129.1327.4/284.327，21BTS445962.57355.2/70.2355.2/310.434，18三氯苯酚2.57194.9/122.8194.9/94.835，402、标准曲线称取空白样品若干份，添加含有4种咪鲜胺类化合物混合标准工作溶液，得到芹菜中目标物的质量浓度分别为0.0016 mg/kg、0.0040 mg/kg、0.0080 mg/kg、0.0160 mg/kg、0.0400 mg/kg、0.0800 mg/kg、0.1600 mg/kg，对4种咪鲜胺类化合物的混合标准曲线溶液进行分析。4种目标物的线性相关系数R2均大于0.999，详见图2，均符合标准要求。图2  4种咪鲜胺类目标物标准曲线图3、样品加标回收实验对芹菜样品进行加标浓度分别为0.0080 mg/kg、0.0400 mg/kg、0.0800 mg/kg的加标实验，每个浓度水平平行实验6次，对精密度和准确度进行评估，样品加标浓度在0.0080 mg/kg~0.0800 mg/kg时，4种目标物的相对标准偏差（RSD）在1.39%~6.83%范围，实验结果优于标准要求的精密度要求。3.1 准确度样品加标浓度在0.0080 mg/kg~0.0800 mg/kg时，4种目标物的回收率在86.6%~119.3%范围，实验结果符合标准的回收率要求。表3.  目标物芹菜样品加标平均回收率序号化合物目标物加标浓度（mg/kg）0.00800.04000.08001咪鲜胺86.6%101.4%119.3%2BTS4459592.5%99.9%115.6%3BTS4459694.8%104.1%111.6%4三氯苯酚98.0%99.3%107.0%3.2 最低定量限方法SN/T 5444-2022提供了方法学验证中的最低定量限，通过芹菜样品加标实验分析，本方法中4种目标物的方法最低定量限均为0.0016 mg/kg，低于标准要求的最低定量限（0.0100 mg/kg），体现了禾信LC-TQ 5200具有优异的灵敏度，满足芹菜中咪鲜胺及其代谢物的检测要求。结论本文依据SN/T 5444-2022，采用禾信LC-TQ 5200分析了芹菜样品中的4种咪鲜胺类化合物含量。实验结果显示：4种咪鲜胺类化合物含量目标物的线性相关系数R2均大于0.999，符合标准要求；加标精密度RSD在1.39%~6.83%范围内，满足标准的精密度要求；芹菜样品基质加标平均回收率在86.6%~119.3%范围内，符合标准要求；本方法中4种咪鲜胺类化合物的方法最低定量限均为0.0016 mg/kg，低于标准要求的最低定量限（0.0100 mg/kg），体现了禾信LC-TQ 5200具有优异的灵敏度，满足植物源食品中咪鲜胺及其代谢物的检测要求；定性目标物的特征峰保留时间和相对离子对丰度比及其相对误差均符合标准要求。上述结果表明禾信LC-TQ 5200具有优异的重现性和检测灵敏度，完全满足SN/T 5444-2022标准要求。参考文献1. SN/T 5444-2022 出口植物源食品中咪鲜胺及其代谢产物的测定 液相色谱-质谱/质谱法禾信质谱 股票代码HEXIN MASS SPECTROMETRY688622 SN/T 5444-2022芹菜中咪鲜胺及其代谢物残留测 定 山 LAN LCTQ 5200 ●//// 官方公众号 SN/T 5444-2022芹菜中咪鲜胺及其代谢物残留测定 前言 咪鲜胺是一种广谱杀菌剂，可用于防治禾 谷类作物茎、叶、穗上的许多病害，如水 稻稻瘟病及白粉病、叶斑病等。咪鲜胺在 环境中会先降解成 n-丙基-n-[2-(2,4,6-三 氯苯氧基)乙基]脲和 n-醛基-n[2-(2,4,6,-三氯苯氧基)乙基]脲,最后降解成 2,4,6-三 氯苯酚。咪鲜胺属于低毒性杀菌剂，但其 最终代谢产物可能会对环境以及人类产生 长期不良影响，因此在检测咪鲜胺的同时 检测2,4,6-三氯苯酚是非常有必要的。本文参考SN/T 5444-2022《出口植物源食 品中咪鲜胺及其代谢产物的测定液相色 谱-质谱/质谱法》标准，使用液相色谱-串 联质谱仪对芹菜中的咪鲜胺及其代谢物进 行分析，通过检出限、定量限、精密度、准确度等指标评估质谱仪（禾信 LC-TQ 5200）性能，证明禾信LC-TQ 5200满足 芹菜中咪鲜胺及其代谢物检测的需要。 实验部分 样品前处理 称取 10 g试样，置于 50 mL具塞离心管 中，加入20 mL酸化乙腈、6.0 g氯化钠及 1颗均质子，充分混匀后，涡旋振荡10 min，8000 r/min离心5 min，移取10 mL加入 15 mL离心管（含有900 mg硫酸镁、100mg PSA、10 mg GCB），涡旋振荡5 min，8000 r/min离心5 min，准确吸取5 mL上 清液于10 mL试管中，置于氮吹仪中，35℃浓缩至近干，用 2 mL乙腈复溶，涡旋 1min，取上清液过0.22 μm有机滤膜，供仪 器分析。 仪器条件 表1.仪器方法参数 模块 参数 值 色谱 色谱柱 Waters ACQUITY UPLC BEH C18（50×2.1 柱温 3m5m℃，1.7 μm） 流动相 A相：甲醇；B相：5 mmoL/L乙酸铵溶液 流速 0.3 mL/min 进样量 10 μL 洗脱 离子源 0~0.50 min：20%A，80%B；1.00~3.5 min： E8S0I%+A和， 2E0SI%-B；4.00~6.00 min：20%A，80%B 质谱 检测模式 多反应监测（MRM） 碰撞气（CAD） 0.40 mL/min 气帘气（CUR） 5.0 L/min 雾化气（GS1） 1.20 L/min 加热气（GS2） 12.00 L/min 喷雾电压（IS） 5000V 加热温度（TEM） 650℃ 结果与讨论 1、标准谱图和物质信息 咪鲜胺及其代谢物标准品总离子流图见图 1。目标化合物的浓度为 20.0 ng/L，各目标化合 物和内标出峰顺序、保留时间以及特征离子信息见表2。 图1 咪鲜胺及其代谢物标准品总离子流图和MRM色谱图 表2.化合物的保留时间和特征离子信息表 名称 RT，min 定性离子对 定量离子对 碰撞能量V 咪鲜胺 2.59 376.2/70.2 376.2/308.5 35，16 BTS44595 2.61 327.4/129.1 327.4/284.3 27，21 BTS44596 2.57 355.2/70.2 355.2/310.4 34，18 三氯苯酚 2.57 194.9/122.8 194.9/94.8 35，40 2、标准曲线 称取空白样品若干份，添加含有4种咪鲜胺类化合物混合标准工作溶液，得到芹菜中目标物 的质量浓度分别为0.0016 mg/kg、0.0040 mg/kg、0.0080 mg/kg、0.0160 mg/kg、0.0400mg/kg、0.0800 mg/kg、0.1600 mg/kg，对4种咪鲜胺类化合物的混合标准曲线溶液进行分 析。4种目标物的线性相关系数R2均大于0.999，详见图2，均符合标准要求。 图2 4种咪鲜胺类目标物标准曲线图 3、样品加标回收实验 对芹菜样品进行加标浓度分别为0.0080 mg/kg、0.0400 mg/kg、0.0800 mg/kg的加标实验，每个浓度水平平行实验 6次，对精密度和准确度进行评估，样品加标浓度在 0.0080mg/kg~0.0800 mg/kg时，4种目标物的相对标准偏差（RSD）在1.39%~6.83%范围，实验结 果优于标准要求的精密度要求。 3.1准确度 样品加标浓度在 0.0080 mg/kg~0.0800 mg/kg时，4种目标物的回收率在 86.6%~119.3%范 围，实验结果符合标准的回收率要求。 表3. 目标物芹菜样品加标平均回收率 序号 化合物 目标物加标浓度（mg/kg） 0.0080 0.0400 0.0800 1 咪鲜胺 86.6% 101.4% 119.3% 2 BTS44595 92.5% 99.9% 115.6% 3 BTS44596 94.8% 104.1% 111.6% 4 三氯苯酚 98.0% 99.3% 107.0% 3.2最低定量限 方法SN/T 5444-2022提供了方法学验证中的最低定量限，通过芹菜样品加标实验分析，本 方法中 4种目标物的方法最低定量限均为 0.0016 mg/kg，低于标准要求的最低定量限 （0.0100 mg/kg），体现了禾信 LC-TQ 5200具有优异的灵敏度，满足芹菜中咪鲜胺及其代 谢物的检测要求。 结论 本文依据 SN/T 5444-2022，采用禾信 LC-TQ 5200分析了芹菜样品中的 4种咪鲜胺类化 合物含量。实验结果显示：4种咪鲜胺类化 合物含量目标物的线性相关系数 R2均大于 0.999，符合标准要求；加标精密度 RSD 在 1.39%~6.83%范围内，满足标准的精密度要 求；芹菜样品基质加标平均回收率在 86.6%~119.3%范围内，符合标准要求；本方 法中 4种咪鲜胺类化合物的方法最低定量 限均为 0.0016 mg/kg ，低于标准要求的最低 定量限（0.0100 mg/kg ），体现了禾信 LC-TQ 5200具有优异的灵敏度，满足植物源食 品中咪鲜胺及其代谢物的检测要求；定性目 标物的特征峰保留时间和相对离子对丰度 比及其相对误差均符合标准要求。上述结果 表明禾信 LC-TQ 5200具有优异的重现性和 检测灵敏度，完全满足 SN/T 5444-2022标 准要求。 参考文献 1. SN/T 5444-2022出口植物源食品中咪鲜胺及其 代谢产物的测定液相色谱 -质谱 /质谱法