仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯

【分享】UV测定中的问题

紫外可见分光光度计(UV)

  • UV测定中的问题希望对大家来说有点点用处




    在UV测定中的常见问题回答

    以下在岛津UV(紫外可见分光光度计)上测定的总结

    液体的测定

    [问题1] 如何使用UV更好的测定浓度高的溶液?
    [回答]
    因为样品的吸收值(Abs.)高(大约2 Abs.以上)时,易出现测定误差,所以要稀释或使用短光程池使吸收值降低后再测定。
    [稀释]
    例如,浓度100的样品吸收值为2.7时,稀释为1/5的浓度,即20。测定得到的吸收值乘以5,换算得出浓度100的吸收值。
    [使用短光路光程池]
    稀释繁复时,可以使用短光程池(1mm/2mm/5mm等,要与专用隔板一起使用,保证光垂直照射样品池)例如,上面的例子可以使用2mm光程池测定。可以得到一个和上面一样的低吸收值。(当然测空白也要用2mm光程池。)
    如果想换算为10mm,可以用这个吸收值乘以5。因为浓度和光路长成比例,所以使用A mm的池子换算为使用10mm光程池的测定值时,要(10/A)加倍。

    [问题2]为什么测定浓度高的溶液时误差变大?
    [回答]
    原因是分光光度计上有杂散光。杂散光就是目的波长以外多余的(不纯的)光,这会使测定准确度下降。低档的UV杂散光多。使用低档UV测定的结果,吸收值超过1时,稀释后使吸收值在1以下测定比较安全。

    [问题3]可以测定浓度为多少的(限度)稀溶液?
    [回答]
    因为每种物质具有其各自不同的吸收系数,所以不能用mg/l和mol/ml等单位来回答。将使用吸收值(Abs.)表现.
    一般情况下,UV的噪声水平(数值的漂移)在0.002Abs.左右。因为定量下限(可以测定浓度为多少的稀溶液的限定浓度)可以说是噪声水平的10倍,所以UV的定量下限约0.02Abs.左右。
    因此,吸光度值在0.02Abs以下时,可以说在定量测定上浓度过稀。
    此时,使用长光路池子,提高吸收值后测定(100mm/50mm/20mm长等)。

    [问题4]溶液的测定方法是什么?
    [回答]
    溶液的测定方法见下文。典型的步骤如下。
    双光束分光光度计
    [步骤]
    1.    两个池子中加入溶剂,把池子放入样品侧(以下简称S侧)和参比侧(以下简称R侧)的池架内。
    2.    基线校正。(基线校正结束后,画面上的值不为0时,在数值稳定的波长处自动归零。)
    3.    从S侧取出池子,倒掉溶液,加上要测定的溶液。放入S侧的池架内。(R侧仍是1. 的状态。)
    4.    测定。以下,根据样品数量重复3. ~4.。

    单光束分光光度计
    [步骤]
    1.    池子中加入溶剂,放入池架内。
    2.    基线校正。(基线校正结束后,画面上的值不为0时,在值稳定的波长上自动归零。)
    3.    取出池子,倒掉溶液,加上要测定的溶液。放入池架内。
    4.    测定。以下根据样品数量重复3. ~4.。

    注意:3. 通常用样品溶液清洗两次后,测定第三次的样品溶液。

    [问题5]狭缝宽是什么意思?
    [回答]
    使用分光光度计测定,重要的条件就是狭缝宽。
    狭缝宽具有和分辨率、(光谱)谱带宽大致相同的意思。
    狭缝变大,打到样品上的光量就会增多,分辨率会下降。狭缝宽减小,光量就会减少分辨率会上升,但数据噪音会变大,数据稳定性变差。
    进行什么样的测定由最合适的狭缝宽决定。
    大致来讲,测定溶液狭缝通常设为2nm。(另外,即使不是溶液,测定的是玻璃和滤光片的透过率,狭缝设为2nm即可。)
    使用积分球测定固体狭缝应设为5nm以上。

    通常,到达检测器的光量越多,越能得到噪声少的数据。因为使用积分球测定会损失很多的光能量,所以需要把狭缝设大。虽然狭缝越大分辨率越低,但是使用积分球测定固体受分辨率的影响很小,所以建议优先考虑光量。
    光谱曲线的峰尖锐时需要设定小的狭缝。虽然有时溶液需要罕有的1 nm的分辨率(狭缝),但是一般2nm就足够。

  • 该帖子已被管理者-初学者&九点虎设置为精华,下面是奖励记录:加10积分,加5声望
    +关注 私聊
  • 初学者&九点虎

    第1楼2007/10/08

    这么看是不是好点

0
    +关注 私聊
  • mifeng7530

    第2楼2007/10/08

    我们就有一台UV2550谢谢楼主

0
    +关注 私聊
  • 初学者&九点虎

    第3楼2007/10/08

    例如,浓度100的样品吸收值为2.7时,稀释为1/5的浓度,即20。测定得到的吸收值乘以5,换算得出浓度100的吸收值。
    有没有科学依据???

0
    +关注 私聊
  • 高卧东山

    第4楼2007/10/08

    它的意思是不是这个浓度100的样品还是遵循比尔定律的,但是直接测定可能误差较大,所以用低浓度的换算一下

    zhouyuhu 发表:例如,浓度100的样品吸收值为2.7时,稀释为1/5的浓度,即20。测定得到的吸收值乘以5,换算得出浓度100的吸收值。
    有没有科学依据???

0
    +关注 私聊
  • 初学者&九点虎

    第5楼2007/10/08

    狭缝宽具有和分辨率、(光谱)谱带宽大致相同的意思。
    狭缝变大,打到样品上的光量就会增多,分辨率会下降。狭缝宽减小,光量就会减少分辨率会上升,但数据噪音会变大,数据稳定性变差。
    进行什么样的测定由最合适的狭缝宽决定。
    我也不是很同意这种说法
    请问你问的谁?

0
    +关注 私聊
  • 爱就上吧

    第6楼2007/10/08

    紫外分光光度计对浓度的要求是个常识性问题!
    不能测定浓度太高的溶液这个东西很早就应该学过吧

    ku_coffee 发表:UV测定中的问题希望对大家来说有点点用处




    在UV测定中的常见问题回答

    以下在岛津UV(紫外可见分光光度计)上测定的总结

    液体的测定

    [问题1] 如何使用UV更好的测定浓度高的溶液?
    [回答]
    因为样品的吸收值(Abs.)高(大约2 Abs.以上)时,易出现测定误差,所以要稀释或使用短光程池使吸收值降低后再测定。
    [稀释]
    例如,浓度100的样品吸收值为2.7时,稀释为1/5的浓度,即20。测定得到的吸收值乘以5,换算得出浓度100的吸收值。

0
    +关注 私聊
  • ldgfive

    第7楼2007/10/12

    应助工程师

    不错!好东西!

0
    +关注 私聊
  • rainycc

    第8楼2007/10/16

    学习中,有点看不懂

0
    +关注 私聊
  • 水晶

    第9楼2007/10/19

    技术性的贴子语言描述应该准确,否则容易误导别人。

0
    +关注 私聊
  • lingdiankongbai

    第10楼2007/12/20

    我是新手,我也看了你们的一些帖子,我想问一些在测定时的一些注意事项,我用的是尤尼卡2100的,仪器可以连接电脑的,但是我觉得用起来不方便,而且有时候测出来是负值,我觉得不可能的,而且吸光度最好不能超过多少?在仪器调零上也不是很清楚,有些人都把盖子打开的,有些就关着的,我都听的很模糊了

0
查看更多
猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐
举报帖子

执行举报

点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...