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【求助】测定吸光度时对背景色的要求

紫外可见分光光度计(UV)

  • 近日我在用比色法做酪氨酸酶的抑制剂研究
    具体方法如下:
    test reaction mixtures were prepared by adding 40 U of mushroom tyrosinase to 20 μl of plant extract, and then adding 40 μl of 1.5 mM L-tyrosine and 220 μl of 0.1 M sodium phosphate buffer (pH 6.5). The resulting mixture (300 μl) was incubated for 20 min at 30°C and absorption at 475 nm was measured. The same mixture, but without plant extract, was used as a control.
    The percent inhibition of tyrosinase activity was calculated
    as follows:
    %inhibition={[(A-B)-(C-D)/(A-B)}*100
    A:OD at 475nm without test substance but with mushroom tyrosinase
    B:OD at 475nm without test substance and mushroom tyrosinase
    C:OD at 475nm with test substance and mushroom tyrosinase
    D:OD at 475nm with test substance but without mushroom tyrosinase

    问题:475nm是酪氨酸在酶催化反应生成的dopachrome的最大吸收峰,但是我的样品本身颜色比较浓重,测定过程中的D项值即base的吸光度可以达到0.4-0.6,而C值有时比D值大,有时比D值小,这是什么原因?base的值太大是不是测得的实验数据不可信阿?是不是应该想办法消除base的颜色呢?
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  • 初学者&九点虎

    第1楼2008/01/23

    您有没有做光谱扫描呢?
    你先做个光谱图,传上来,帮您分析分析
    建议你先翻译成中卫,好多人英语没您那么好

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  • lzx3000

    第2楼2008/01/24

    我做了光谱扫描的,但是效果不好,我重新扫描后再上传。我应该翻译成中文给大家节省时间的,刚来不懂规矩,还请见谅。谢谢您的指导。

    zhouyuhu 发表:您有没有做光谱扫描呢?
    你先做个光谱图,传上来,帮您分析分析
    建议你先翻译成中卫,好多人英语没您那么好

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  • 初学者&九点虎

    第3楼2008/01/27

    哈哈,您太客气了,这里没有规矩,大家畅所欲言,有什么问题请和我联系

    lzx3000 发表:我做了光谱扫描的,但是效果不好,我重新扫描后再上传。我应该翻译成中文给大家节省时间的,刚来不懂规矩,还请见谅。谢谢您的指导。

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  • 庐山居士

    第4楼2008/01/27

    如果有条件的话,我觉得你有必要对仪器作如下的测试:
    一、波长准确度测试
    二、光度准确度测试
    三、杂散光测试
    四、噪声测试

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