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【原创】固相萃取(SPE)应用实例汇集(16)---每天一例

chinachrom

2008/04/28

前处理综合讨论

尿液中的合成代谢类固醇类药物固相萃取净化方法
1．样品预处理
在尿液中加入内标物和2mLβ-葡萄糖醛酸酶( 5000F单位/mL)充分混合，在65℃条件下水解3h，处理前冷却，用1.0mol/L的KOH溶液调节pH值至6.0±0.5；
2. SPE净化
a. 活化：分别用3mL甲醇，3mL去离子水和1mL 100mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH6.0)；在上样前保持柱床湿润；
b. 上样：以1~2 mL/min的流速将样品载入SPE柱；
c. 淋洗：用3mL10%(v/v)甲醇去离子水溶液淋洗，通空气5min干燥柱床；再用1mL的正己烷或者正己烷/乙酸乙酯( 50/ 500，v/v)淋洗SPE柱；
d. 洗脱：可以选择如下四种方法，收集洗脱液；
1） 3mL二氯甲烷/异丙醇/NH4OH( 78/ 80/ 2, v/v)，溶剂流速控制1~ 2mL/min，收集洗脱液；洗脱液必须为当天制备的新鲜溶液;
2）3mL二氯甲烷/异丙醇(80/20);
3）3mL乙酸乙酯;
4）3mL甲醇。
3．蒸发干燥
4．衍生化
加入50μL MSTFA(含有3%的碘化三甲基甲硅烷基)，充分混合，70℃条件下反应 20min，冷却。
5. Varian Saturn 2200 GC-MS检测
6. 样品成分
睾丸激素
19-noretiocholanon
16-A-hydroxyetiocholanone
康复龙
普拉睾酮
10-去甲睾酮
康复龙代谢物1
康复龙代谢物2
11-B-羟基睾丸激素
去氢甲基睾丸素
19-norandosterone
16-A-表睾(甾)酮
司坦唑醇

方法中使用的SPE柱：
Bond Elut Certify(130mg, 3mL,PN.12102051)。

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