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【原创】俺的一点点总结----分光测定过程中的干扰及其消除

初学者&九点虎

2008/05/20

紫外可见分光光度计（UV）

在分光测定过程中，不可能一帆风顺的完成，由于显色剂的选择性差，简单的说，就是显色剂不仅仅和目标组分反应，还和别的组分反应，这样的话测定结果就会偏高，这是在可见区的情况；在紫外区呢，俺觉得干扰更大，因为很多物质都有紫外吸收，当你扫描纯品的时候，感觉峰形很好，找对大吸收也很容易，例如某组分，在光谱扫描的时候最大吸收为328纳米，然后您转到光度去进行测定，在328纳米出进行标准曲线的制作和样品的测定，可能得到的结果不正确，偏高的可能性很大。
1 在可见光区，可能存在以下几种干扰情况：
1.1干扰组分本身有颜色
俺是做乳品的，就以乳品为例进行说明，大家没意见吧。
大家应该喝过果粒酸牛奶吧，尤其是草莓的，特好喝，我选择，我喜欢。在酸奶的检测指标里，有亚硝酸盐这一指标，在测定时是加显色剂在538纳米下测定的，但在前处理过滤后，一般的奶样滤液都是无色的，但就是草莓的，过滤完后滤液是红色的，这样在测定过程中产生了干扰，使测定结果偏高。
如何结果这一问题呢，很多人想了很多办法，之前看文献，有用活性炭吸附的，也有过什么什么柱子的，我也记不住，不好意思，对不住大家。我用的方法是采用双光束，以滤液为参比进行背景的扣除，做了很多试验，效果还不错，大家可以参考参考哦。
1.2组分与显色剂反应生成有色化合物，并在测定波长有吸收
这种情况下说明显色剂的特异性和选择性不好，最好的办法就是换别的显色剂，但这话说起来容易做起来难啊。受很多条件的限制，象我，老老实实的按照国标方法做去吧，俺想大家可能也有不少困难，因为一种显色剂的寻找不是简单的事，需要很大的人力，物力，财力等的支持，当然我也不推荐，除非您是研究人员。对于普通老百姓，只能找别的方法了。
控制样品溶液的酸度是一个选择的方法，因为在络合反应中，络合物的稳定常数不同，要求处在反应平衡中的配位体的浓度也不相同．利用控制样品溶液的酸度的方法，可控制显色剂的离解平衡从而控制配位体浓度，提高反应的选择性，保证反应进行完全．
例如，双硫腙能与Pb2+，Cu2+，Ni2+，Cd2+，Hg2+等10多种金属离子形成有色配合物，其中与Hg2+生成的络合物最稳定，在0.5mol／L的H2SO4介质中仍能反应完全，而其他金属离子在此条件下不发生反应，这例子是抄别人的。
俺呢，在一般设计分光试验的时候，首先考虑酸度问题，在显色条件下，溶液的酸度使干扰组分水解，析出沉淀，使溶液混浊，无法进行吸光度值测定；干扰组分能与待测离子或与显色剂形成更稳定的配合物，破坏显色反应进行完全，以上是干扰的问题。但不仅仅是因为消除干扰的问题，更重要的是，组分在一定的酸度下才能以某种固定的形式存在，在别的酸度条件下，可能分解，也可能以别的形式存在，所以，大家要把这个问题放在很重要的位置考虑。哈哈，这么一说，别把大家吓着了，其实注意到就可以，也不复杂，俺的建议就是用好缓冲溶液，这一问题保证解决，缓冲溶液能控制你的样品溶液在一定的酸度条件下保持稳定的状态哦。俺一般就用磷酸缓冲溶液，比较方便，也比较便宜，能达到大家所需要的酸度范围，价格也相对比较便宜，也比较好买，严重推荐。
下面我把磷酸缓冲溶液的配置方法列出来，大家参考参考。
磷酸盐缓冲液磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.2 mol/L）
pH 0.2 mol/L
Na2HPO4 (mL) 0.2 mol/L
NaH2PO4 (mL) pH 0.2 mol/L
Na2HPO4 (mL) 0.2 mol/L
NaH2PO4 (mL)
5.8 8.0 92.0 7.0 61.0 39.0
5.9 10.0 90.0 7.1 67.0 33.0
6.0 12.3 87.7 7.2 72.0 28.0
6.1 15.0 85.0 7.3 77.0 23.0
6.2 18.5 81.5 7.4 81.0 19.0
6.3 22.5 77.5 7.5 84.0 16.0
6.4 26.5 73.5 7.6 87.0 13.0
6.5 31.5 68.5 7.7 89.5 10.5
6.6 37.5 62.5 7.8 91.5 8.5
6.7 43.5 56.5 7.9 93.0 7.0
6.8 49.0 51.0 8.0 94.7 5.3
6.9 55.0 45.0
Na2HPO4•2H2O分子量＝178.05；0.2 mol/L溶液为35.61 g/L。
Na2HPO4•12H2O分子量＝358.22；0.2 mol/L溶液为71.64 g/L。
NaH2PO4•H2O分子量＝138.01；0.2 mol/L溶液为27.6 g/L。
NaH2PO4•2H2O分子量＝156.03；0.2 mol/L溶液为31.21 g/L。
当然还有很多别的缓冲溶液也很不错。
1.3更烦的是，组分在以上利用酸度控制消除不了的情况下，怎么办呢，推荐加入掩蔽剂进行处理
在显色反应条件下，掩蔽剂不与待测离子作用，只与干扰离子反应，掩蔽剂与干扰离子形成的络合物应不干扰待测离子的测定．选择适当的掩蔽剂是消除干扰组分影响常用的有效方法．
举个例子，有人经常补钙或喝高钙奶吗？其实牛乳本身里面的钙含量也不是很高，所谓的高钙奶都是加的什么什么所谓的营养强化剂，很时髦的名词，概念的炒做，当然补钙的作用是肯定的。但我还是喜欢喝纯牛奶，不添加任何东西的哪种，扯远了。这个营养强化剂中呢，有一个磷酸钙，我们经常测其中的钙含量，一般我们都用ICP做，但为了说明这个问题，在测定的时候，好象要加一种糊精的玩意，是掩蔽剂，效果据说还不错。
1.4 在以上效果都不管用的情况下，只能把干扰组分扫地出门了，进行分离，这就要求前处理需要下很大的工夫。
常用的分离方法有：沉淀、萃取、离子交换、蒸发、蒸馏等．现在还出现很多时髦的东西，什么固相萃取柱啊，免疫亲和柱啊，俺也承认效果很好，但真的很贵，除非您和您的单位有钱。我推荐的是离子交换柱，便宜，也好用，但就是在柱子填充物选择上需要下一些工夫了。

精
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coldmoon

第1楼2008/05/21

大哥。。我是做油脂的。最近也是用分光光度比色法测甲醇。。但是遇到很多问题。。能否请教一二。。

0

初学者&九点虎

第2楼2008/05/21

没问题,大家一起交流吗?
coldmoon 发表:大哥。。我是做油脂的。最近也是用分光光度比色法测甲醇。。但是遇到很多问题。。能否请教一二。。

0

精
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goldenlion

第3楼2008/05/22

学习一下，顶了！

0

chengyazhang

第4楼2008/05/23

我用分光光度计测定萤石中的二氧化硅的含量时,结果有时偏低有时偏高,是何原因啊?请教大虾

0

青山依旧

第5楼2008/05/23

很实用的总结，谢谢。

0

初学者&九点虎

第6楼2008/05/23

是同一个样品进行多次测定时,有偏高偏低的情况吗?
是不是在允许差范围之内啊,具体分析还请您把方法上传上来,一起研究一下
chengyazhang 发表:我用分光光度计测定萤石中的二氧化硅的含量时,结果有时偏低有时偏高,是何原因啊?请教大虾

0

yhy5993

第7楼2008/05/23

哦,我们公司的分光仪是测量透过率的

0

zealot81

第9楼2008/05/26

不错的经验之谈哦

0

勇往直前

第10楼2008/05/28

很实用的经验,又可以学习一下,谢谢!

0

liu999999

第11楼2008/05/28

经验与心得的帖子，很值得好好学习。

0

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