【讨论】你会在什么情况下做杂质自身对照？

happyjyl

2008/06/11

私聊

气相色谱（GC）

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借贵版人气问一个问题：测定样品中的杂质时，什么情况下不用杂质标准品做对照，而采取把样品稀释后做自身对照？能给出自己工作中具体例子的，给悬赏分。谢谢！

我说的是药品中的有关物质（生产过程中带来的有机杂质），无机杂质和残留溶剂不算。有关物质包括已知杂质和未知杂质，二者加起来是总杂质。

我在中国药典上见到过这样的方法：乙胺嘧啶的有关物质(05版CP第3页）：取本品，加三氯甲烷-甲醇（9:1）制成每1ml中含20mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加同一溶剂稀释成每1ml中含50ug的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法检验，……供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。

详见下面的帖子：
http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20070831/964769/

我在5楼举了几种情况，都是我翻译资料时遇到的。

药品审评中心的老师也发过相关的讨论，见下：
关于HPLC主成分自身对照法检查有关物质时检测波长确定的讨论
http://www.cde.org.cn/page/framelimit.cbs?ResName=dzkw

据说这种稀释后自身对照的方法应用得挺多，但我不知道为什么要这样用。

lyixuan 2008/06/13

紫外检测器、二级管振列检测器、荧光检测器和示差检测器都是选择性检测器，响应值不仅与样品浓度有关系，还与产品结构有关系。响应值就是检测器检测出来的数值，如峰高、峰面积等。响应因子是单位浓度的响应值，只与结构有关系了。两个物质的响应因子相比较，就得到通常的校正因子，这个常用，你应该知道，我们说两个响应因子相似，就默认为校正因子是1，因此自身对照其实就是跟内标法计算公式一样，而外标法其实也就是校正因子是1的内标法计算公式得来的，其原理都是相通的。当杂质标准品难以获得的时候，而化学合成过程中杂质结构往往跟主产物是相似的，因此假设校正因子是1，采用主成分自身对照。如果有杂质标准品，可以把校正因子计算出来的，结果会更准确。推荐你看一下中国药典二部附录V D　高校[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法　3　测定法中的，解释的更清楚。

阿du 2008/06/12

[quote]原文由 [B]happyjyl[/B] 发表: [quote]原文由 [B]duliuhui[/B] 发表: 简单的说，响应因子就是指1个物质，在某一条件下，在检测器检出时给出的信号大小（响应大小）。响应因子相似，即二组物质在同样条件下检出时的信号大小很相近。[/quote] 那跟响应值有什么区别？[/quote] 个人看法，响应因子是指单位质量（浓度）物质在检测器上的响应值。

guest 2008/06/12

[quote]原文由 [B]lianlxh[/B] 发表: [quote]原文由 [B]happyjyl[/B] 发表: 我也是在翻译资料时遇到的。就我看到的资料而言，测定杂质含量时有以下几种情况（假定已知的杂质是A和B，其它都是未知杂质。杂质A的限度为0.1％，杂质B的限度为0.2％，总杂质限度为1.0％。）： 1.用对照溶液测定－－用对照品和一定量的杂质A、杂质B制成对照溶液，使对照溶液中杂质A的含量为0.1％，杂质B的含量为0.2％。供试品溶液色谱图中杂质A和杂质B的峰面积不应超过对照溶液色谱峰中相应的峰面积。 2.用对照溶液的稀溶液测定－－供试品溶液和对照溶液的含量都是25ug/ml,然后取1ml对照溶液，稀释成100ml,得到稀溶液。在供试品溶液色谱图中，不计主成分的峰，任何其它峰的峰面积之和不得超过稀溶液主峰的峰面积（1.0％）。[color=#DC143C]我的问题是：（1)假设供试品溶液色谱图中，主成分的峰面积为X，溶剂的峰面积为Y，其它所有峰的峰面积之和为Z，为什么不直接用Z除以X以得到总杂质含量，而要用对照溶液的稀溶液呢？（2）为什么要先制成对照溶液再稀释，而不是直接制成含量为0.25ug/ml的对照溶液呢？是为了避免误差吗？[/color] 3.自身对照－－取供试品溶液（溶液M）1ml，稀释成100ml（溶液N）。把溶液M和N分别进样。溶液M的色谱图中，不计主成分的峰，任何其它峰的峰面积之和不得超过溶液N色谱图中主峰的峰面积（1.0％）。大学时没有好好学习，很多基本的东西没有搞清楚，所以现在拿上来请教。[color=#00008B]是不是在没有对照品的情况下才会用供试品自身做对照呢？[/color] 另外，你提到“标准品”。我记得在药典还是什么地方看到过：对于生物制品是叫“标准品”，其它都是叫“对照品”。 [/quote] 我不是学习药学的，从分析化学的角度我通常会那么说。在上报新药的申报资料关于标准的部分，通常都是按照药典的要求那么做，但具体为什么不清楚。所有的有关杂质通常都要按照那种格式来做和写资料。[/quote] 我对这个问题的理解： 1.百分之一自身对照法这种方法主要用于杂质与样品在一定波长下有相近的响应值。需要大大增加供试液的浓度，使样品中的杂质能在仪器的灵敏度下被检测出来。由于供试液的浓度太高，此时的样品峰极可能是不在线性范围内的，因此配制1%浓度溶液。 2.纯度检查直接用除溶剂峰和样品峰以外的所用杂质峰和，除以样品峰。 3.杂质对照一般用在已知杂质量较大或已知杂质具有较强的毒性作用，这个时候将被要求单独控制杂质量。

blued 2008/06/12

我记得在ICH Q2b中曾经看到过类似的提法，就是在标准品不可获得的情况下，采用自身对照的方法进行杂质的验证。

yuxiuqin1023 2008/06/12

单杂和总杂控制基本是对合成药物来说，微生物制品纯度、杂质达不到药典要求。对于已知杂质可以通过杂质对照品定量分析，不能确定的杂质只能定性分析，前提是总杂不能超过0.5%。对于通过药理、药代对产品质量有影响的已知杂质就要做杂质自身对照，除非你确定这种杂质对产品质量没有影响，或为未知杂质，单杂不超过0.1%。