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【求助】测GST酶碰到的问题

  • kechenghuang
    2008/06/17
  • 私聊

紫外可见分光光度计(UV)

  • 我在测GST酶时,我碰到了一个非常郁闷的问题,那就是我测的酶活力值居然是负值,对照调零那总是不能很好的调到零,不知道是哪里出问题了,现在我将我的其中的步骤写下来给大家看看,是哪里出了问题:

    PH6,5 0.04M 缓冲液,2.7ML(没有加入EDTA)
    酶液 0.1ML
    20mMGSH 0.1ML
    加入到试管中,30度温浴3分钟
    再加入20mMCDNB 0.1ML

    记录1分钟340nm处的光吸收值的变化。


    其中除了 温浴是在常温下,其它的都是在冰水中。
    请各位帮我看下是哪里出了问题?如果有哪位跟我一样,请电邮我:kechenghuang@gmail.com
    谢谢!
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  • pchduan

    第1楼2008/06/17

    请问您每个都做样品空白吗,测定样品时有没有悬浮物,过一段时间可能会沉淀影响吸光值

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  • 初学者&九点虎

    第2楼2008/06/17

    我不知道您这种情况是偶然,你再做过吗?能不能重现呢?

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  • kechenghuang

    第3楼2008/06/18

    其中的底物是用丙酮来溶解的,比较容易挥发。同时,我在测的时候并没有每个都用样品对照,所以,这也是我的实验失败的原因吧!

    我想我应该在做的时候每个都要用样品对照,这才可能使我的实验更加准确!

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  • 初学者&九点虎

    第4楼2008/06/23

    用丙酮来溶解的,比较容易挥发,挥发也没那么快
    带个标准物质做做,看看什么情况,比较容易找到原因

    kechenghuang 发表:其中的底物是用丙酮来溶解的,比较容易挥发。同时,我在测的时候并没有每个都用样品对照,所以,这也是我的实验失败的原因吧!

    我想我应该在做的时候每个都要用样品对照,这才可能使我的实验更加准确!

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  • kechenghuang

    第5楼2008/06/25

    请问什么是标准物质?还有我想问下,如果我想同时用空白对照和样品对照来调零,我应该怎么做?难道先用空白调再用样品来调吗?
    谢谢 !

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  • pchduan

    第6楼2008/06/25

    我所说的样品空白是指不加样品(可用蒸馏水代替),其他药品跟样品一样依次加入,这样做是为了消除所添加试剂对吸光度的影响

    kechenghuang 发表:请问什么是标准物质?还有我想问下,如果我想同时用空白对照和样品对照来调零,我应该怎么做?难道先用空白调再用样品来调吗?
    谢谢 !

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  • kechenghuang

    第7楼2008/06/26

    pchduan 发表:我所说的样品空白是指不加样品(可用蒸馏水代替),其他药品跟样品一样依次加入,这样做是为了消除所添加试剂对吸光度的影响

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  • pchduan

    第8楼2008/06/28

    既然这样,你可以先用空白调,然后用样品对照调试试看

    kechenghuang 发表:我想知道我应该怎样来利用样品对照和空白对照来调零?谢谢!
    我只是做了样品对照,并且是每个样品就设了个对照,这样才能保证不出现负值。

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