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第1楼2008/11/04
本法用于去除实验用玻璃器皿上的内毒素。将玻璃器皿置于烤箱中,加热到250℃,持续30min,即可去除内毒素。
方法与步骤
1、内毒素去除效率的评估
(1)制备浓度分别为1000和1000EU/mL的CSE溶液。按内毒素测量方法检测这些溶液。
(2)向所有待去除内毒素的玻璃器皿滴入1mL的CSE溶液。(每种类型的玻璃器皿至少有3EU的CSE)。
(3)将玻璃器皿置放烤箱中,在60℃下,干烤持续30min,烘干,然后在烤箱中,250℃下,干烤30min。
(4)加入适量的LAL水,剧烈振荡5min,以清洗玻璃器皿,然后测量清洗后的LAL水中的内毒素的浓度。
(5)比较原来的内毒素含量和现存的内毒素浓度。
当内毒素含量至少减少了3—log时,该方法有效。必要时,重复操作,去除内毒素。用鲎度验法计算内毒素去除的百分比。
2、去除实验玻璃器皿上的内毒素
确定可使内毒素玻璃器皿上的内毒素
对于用来配置无同一内毒素溶液的玻璃器皿,重复操作,直至内毒素含量下降3—log。
(例如,1000 IEU和10000 10EU)
数个加热循环后,用前述的鲎试验法,测定内毒素含量。
3、对照
阴性对照:用只盛有LAL水的玻璃器皿,在250℃下,干烤30min并用LAL法测量内毒素的含量。
阳性对照:干燥(60℃,30min)每种玻璃器皿中的内毒素溶液,不经过干烤(250℃,30min)去内毒素的操作,然后测定其内毒素质量。
质控与提示
(1)保烤箱散热均匀,为此,在操作过程中,可将玻璃器皿放置在烤箱中的每一层上,当温度在250℃后,温度的波动不要超过±15℃。
(2)用含100EU的内毒素过行的检测,可用来确定去内毒素的效率。用含10000EU的内毒素进行的检测,可用来确定对内毒素含量较高的器皿去除内毒素的效率。
(3)如果如果不理想,可增加每一次操作的时间 和操作次数。
(4)其他技术适用于培养基的内毒素,例如,超滤,反向渗透,但比较昂贵。选取有效的滤过膜,确保去内毒素后,培养基的营养成分不丢失并且内毒素含量下降3—log。
houshiji
第12楼2008/11/27
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生物技术药品分离纯化过程中内毒素的去除