dong3626
第1楼2008/11/23
一般来现在纯化his用到的镍柱有两种:Ni-NTA和Ni-IDA
Ni-IDA高亲和力纯化柱可用于纯化多种重组表达系统的表达产物,如经细菌、酵母、昆虫和哺乳动物细胞等表达系统表达的His标签标记的融合蛋白,它是通过三个结合位点与一种三齿螯合剂(亚氨基二乙酸)共价偶联,该螯合剂可结合Ni2+。该纯化介质可在天然、变性或杂交条件下纯化his标签重组蛋白。结合到柱子上的蛋白,用低pH缓冲液或咪唑溶液、甚至组氨酸溶液都可洗脱下来。
Ni-NTA:是一种共价偶联至三齿螯合剂(氮三乙酸或NTA)上的琼脂糖纯化介质(交联度为4%),该螯合剂可通过四个结合区与Ni2+结合,从而纯化His标签的融合蛋白,不会发生Ni2+渗漏。
最早使用的IDA和Ni2+有三个结合位点,结合位点在一个平面上,结合力也最弱,所以在纯化中的泄漏也最多,NTA和Ni2+有4个结合位点,TALON和Co2+也有4个结合位点,形成立体的结合,结合力较强,泄漏也较少。根据产品的介绍,TALON对蛋白质组氨酸的排列有要求,为相邻的组氨酸或处于特殊位置的两个组氨酸,而这一点对Ni-NTA则不那么严格,所以TALON对His标签融合蛋白的选择性也就更高,非特异性蛋白结合就更少。
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