【求助】凝胶渗透色谱是怎么测定分子量的？

http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20080627/1330216/

不知道这个对你有没有用 ，你可以去看看！

凝胶渗透色谱法测定分子量

样品的重均分子量(Mw)和分子量分布(Mw/Mn)由凝胶渗透色谱 (gel permeation chromatography, GPC) 测定。TSP P100 高效液相色谱仪 (美国，Thermoquest公司生产) 配以TSK G3000-PWXL色谱柱。流动相为0.2mol/L

CH3COOH /0.1mol/L CH3COONa溶液，流速1.0ml/min，柱温保持30°C，RI150示差折射检测器检测。测试样品浓度为0.4% (w/v)，以TOSOH pullulan 为分子量标准，用江申工作站(大连江申色谱软件公司生产) 进行数据处理得到重均分子量Mw和分子量分布Mw/Mn。

Determiantion of molecular weight
Weight-average molecular weight (Mw), number average molecular weight (Mn) and molecular weight dispersion (Mw/Mn) of sample were measured by gel permeation chromatography (GPC). The GPC equipment consisted of TSK G3000-PWXL columns, TSP P100 pump and RI 150 refractive index detector. The eluent was 0.2 M CH3COOH/0.1 M CH3COONa. The flow rate and column’s temperature was maintained at 1.0 ml/min. The column temperature was maintained at 30°C. The sample concentration was 0.4 mg/ml. The standards used to calibrate the column were TOSOH pullulan. All data provided by the GPC system were collected and analysed using the Jiangshen Workstation software package.




















Figure 1. GPC profiles of Low Molecular Weight Chitosan

应助达人

首先你要了解的理论：
分子筛效益


　　　一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时，各分子在柱内同时进行着两种不同的运动：垂直向下的移动和无定向的扩散运动。大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出，这种现象叫分子筛效应。具有多孔的凝胶就是分子筛。各种分子筛的孔隙大小分布有一定范围，有最大极限和最小极限。分子直径比凝胶最大孔隙直径大的，就会全部被排阻在凝胶颗粒之外，这种情况叫全排阻。两种全排阻的分子即使大小不同，也不能有分离效果。直径比凝胶最小孔直径小的分子能进入凝胶的全部孔隙。如果两种分子都能全部进入凝胶孔隙，即使它们的大小有差别，也不会有好的分离效果。因此，一定的分子筛有它一定的使用范围。综上所述，在凝胶色谱中会有三种情况，一是分子很小，能进入分子筛全部的内孔隙；二是分子很大，完全不能进入凝胶的任何内孔隙；三是分子大小适中，能进入凝胶的内孔隙中孔径大小相应的部分。大、中、小三类分子彼此间较易分开，但每种凝胶分离范围之外的分子，在不改变凝胶种类的情况下是很难分离的。对于分子大小不同，但同属于凝胶分离范围内各种分子，在凝胶床中的分布情况是不同的：分子较大的只能进入孔径较大的那一部分凝胶孔隙内，而分子较小的可进入较多的凝胶颗粒内，这样分子较大的在凝胶床内移动距离较短，分子较小的移动距离较长。于是分子较大的先通过凝胶床而分子较小的后通过凝胶床，这样就利用分子筛可将分子量不同的物质分离。另外，凝胶本身具有三维网状结构，大的分子在通过这种网状结构上的孔隙时阻力较大，小分子通过时阻力较小。分子量大小不同的多种成份在通过凝胶床时，按照分子量大小“排队，凝胶表现分子筛效应。

应助达人

凝胶色谱法
又称尺寸排除法（或体积排除法）.一种用溶剂作流动相，多孔填料或多孔交联高分子凝胶作分离介质的液相色谱法.分离机理有平衡排除，有限扩散以及流动分离等.它主要利用混合物溶液中物质分子大小不同，因而通过多孔凝胶速率不同而加以分离.它可以作为未知物液相色谱检测的第一步.除用于未知物的分离和分析外，也能用于工业产品的质量控制和产品的常规检测.

GPC测分子量与用设么检测器检测器关系不大，它主要是用已知分子量的标样做分子量对保留时间的曲线，再测样品，通过保留时间算出分子量。
因为GPC主要应用在高聚物大分子上，而这类样品很多时候没有紫外吸收，所以用示差检测器的居多，其次是紫外，当然还有一些样品可以用蒸发光或红外，或
2个及2个以上的检测器串联起来使用。
现在还有很多用GPC-光散射连用的，但这时GPC主要起分离作用，分子量的计算又是通过光散射的理论了。同时还可以配上粘度检测器，得到更多的信息。

GPC不是通过检测器来分析分子量的.它是通过已知分子量的标准样品的Ve值和分子量的关系(logM--Ve)来测定的,当然要经过校正(如普适校正).