【求助】液相（HPLC)衍生化单糖组分分析的问题？

应助达人

是不是没有衍生好？

你好，非常感谢，不过你的梯度是怎么设定的，还有流动相是什么，你的色谱柱是C18柱吗？我用以下方法衍生化
将待测样品置于1 mL 具塞试管中,加或不加内标溶液,室温减压真空干燥;向干燥好的试管中依次
加入20μL PMP 溶液(0. 5 mol/ L 甲醇溶液) 和20μL 氢氧化钠溶液(0. 3 mol/ L) ,混匀后置于70 ℃水浴中
加热反应30 min ,取出室温放置10 min ;再加入25μL 盐酸溶液(0. 3 mol/ L) 中和,混匀后用0. 5 mL 乙酸
异戊脂萃取,涡旋3 min ,离心15 min ,小心弃去有机层,再萃取一次得到下层,加水150μL 混匀并离心15
min ,用于HPLC 分析。请您看看是否有哪里不对？

应助达人

这个我也没有做过，上面那上是文献中的，色谱条件都在上面了。梯度是从16%乙腈开始，到55分钟时为25%乙腈。色谱柱为ODS也就是反相C18柱。

我也遇到和您同样的问题, 衍生化方法也和您在回贴中描述的完全一样, 我希望了解您是否已经得到解决, 望不吝赐教!
我现在想不到问题出在哪里, 开始怀疑PMP试剂是否有什么不同了.

我们也做过这个实验，但是响应都挺好的，我们流动相是乙腈：缓冲溶液ph6.8 =20：80
会不会你们的PMP加少了。。顺便附个这方面的文献给你吧。。

我也在做这个实验，但是衍生化效果不好，衍生物不稳定，还有衍生化反应中氢氧化钠由氨水取代较好。