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【第三届原创大赛】巧用微量比色池

夕阳

2010/09/01

紫外可见分光光度计（UV）

维权声明：本文为本人原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现的，均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。
在使用分光光度计时，迫于样品量少而改用微量比色池，这是一个众所周知的常识。但是如果使用不当，则会造成测试值的误差问题就不一定被所有人重视到了。

前不久，遇到一个案例，其故障表现为：当使用微量比色池及普通比色池测试同一个样品时，其两个结果值不一致。使用普通比色池测得的结果为1.49 Abs ，而使用微量比色池测得的结果却为0.928Abs，两者相差1.6倍，见图-0所示：

图-0 维修前的样品吸光值

究其原因，就是微量池的位置与光轴不能拟合之故。下面就将此次排查步骤及解决方法展现给广大版友。我们一般常用微量的比色池的外观及结构如图-1，图-2所示：

图-1 两种常用微量比色池

图-2 微量比色池结构示意图

在上述两种微量池中，左侧的内衬材料为透明的，而右侧的为黑色；由于内衬为透明材料的比色池价格较为便宜，因此使用此类微量比色池的用户较多。本文例举的案例就是使用这种内衬为透明材料的比色池。

另，该仪器的比色池架是可以与光轴呈垂直方向来调节的，如图-3所示：

图-3 可调节的微量池架

该用户开始使用微量比色池时没有加装遮光板，而是裸用，如图-4所示：

图-4 微量池的裸用状态

在上述情况下不难发现，测量光束的光斑不但会照射到微量池的通光槽上，同时也有可能照射到池子的内衬玻璃上，致使吸光值产生误差（一般为吸光值减少）。类似这种使用方法目前大有人在。

正确的使用方法是应该在微量池的前面加装一片遮光板，并且这个遮光板的开槽宽度要与微量池的通光槽的宽度一致，这样才会避免测量光束照射到内衬材料上。图-5就是这种微量池与遮光板一起搭配的实例：

图-5 微量池与遮光板

所幸运的是我找到了随微量池一起购买的遮光板，于是满怀希望地将遮光板与微量池一齐安装到池架上，心想，这下问题可以解决了。没料到，新的问题来了。由于样品池架是放置普通标准型比色池的（10x10mm)，而且容积还有一定的咣量，因此为了固定池子的相对位置，故在池架内安装了一片固定弹簧片，这也是目前大多数仪器的样品池架共有的设计思路。见图-6池架细部图所示：

图-6 池架细部

由于遮光板安放得严丝合缝，尽管其开槽可以被调整在光轴上，但是由于上述池架内部的构造的原因，致使微量池的通光槽却偏离了光轴。这样仍然会有一部分入射光束照射到池子的内衬材料上，还是不能保证挡光板的开槽与微量池的通光槽完全吻合。如图-7所示：

图-7 遮光板与池子的相对位置

鉴于上述情况该如何解决呢？于是乎，决定抛弃原先的传统思维方式，舍弃掉遮光板。取一段长度与池子高度接近的电工所用的黑色塑料绝缘胶带（市面上很好买到），并从中间一剖为二，分别沿着微量池通光槽的两个边沿粘贴在微量池的受光的一面，如图-8所示：

图-8 粘贴上胶带的微量池

这样，在使用微量池的过程中，从原先的光轴，遮光板，微量池这三个需要整合的元素，简化为仅有光轴与微量池这两个元素了。这无疑大大降低了调整的难度。

将改造后的微量池插入到池架中，然后调整微量池的通光槽与光轴的相对位置，调整依据是：使透过率最大或吸光值最小；如图-9所示：

图-9 调整池架

经过这种改造和调整，最后的测试值终于达到了与使用标准池测得的结果一致。

图-10 最终的测试值

备注：

（1）这种方法最适合没有挡光板或挡光板与微量池不吻合的场合下。

（2）如果池架为固定型即不能调整时，可以通过在微量池与池架内壁之间加填黑色垫衬物（如黑色海绵，黑色硬纸片）的办法加以解决。

（3）这种方法的缺点是：微量池在超声清洗后塑料胶带容易脱落，需要重新粘贴。

（4）如有条件最好使用内衬材料为黑色石英的微量比色池。

（5）在使用微量比色池时，仪器的狭缝宽度尽量选择的窄一些为好，这样便于入射光完全照射到池子的通光槽中，以增加信噪比。

（6）至于参比池可以直接使用普通的标准池放置参比溶液；如果考虑两束光斑大小不一致会影响测量结果的话，则可以通过基线校正或固定波长下的校零来克服。

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分
该帖子已被版主-叶子加10积分，加2经验;加分理由:anping老师大作

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tutm

第2楼2010/09/01

呵呵，我们买的都是黑色的微量池，应该可以避免这种问题了。

另外，想问一下这种透明的微量池，如果是四面都是透明的，是不是可以转90度使用，相当于短光径的比色皿？

还有，请你看一下http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100901/2755808/，有没有自动调光径长度的流动池比色皿？

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分
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〓疯子哥〓

第3楼2010/09/01

又见安老师的大作，写的非常的详细，一目了然！
以前只是简单操作过UV，没有动过微量池架，安老师又让我进距离了截微量池架。

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初学者&九点虎

第4楼2010/09/01

已经搞定了
夕阳(anping) 发表:发错版面了，版主帮助移到分光版面吧

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夕阳

第5楼2010/09/01

应助达人

tutm老师提出了个新颖的问题。我明白tutm老师提出这个问题的意义。如果这种透明的微量池可以转个90度使用，则避免了使用遮光板的麻烦。但是这种池子的内衬材料较厚，并且不清楚究竟是何种材料构成的。如果是玻璃的话，那在紫外区是不能使用的。
关于自动改变光径长度的比色池，我还从未听说过，孤陋寡闻了。
tutm(tutm) 发表:呵呵，我们买的都是黑色的微量池，应该可以避免这种问题了。

另外，想问一下这种透明的微量池，如果是四面都是透明的，是不是可以转90度使用，相当于短光径的比色皿？

还有，请你看一下http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100901/2755808/，有没有自动调光径长度的流动池比色皿？

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zwyu

第6楼2010/09/01

刚想说印象中C Technologies有一种可变光程的光纤探头，可查了一下，这个还是从tutm老师的帖子http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20090208/1726579/里知道的，呵呵

tutm(tutm) 发表:呵呵，我们买的都是黑色的微量池，应该可以避免这种问题了。

另外，想问一下这种透明的微量池，如果是四面都是透明的，是不是可以转90度使用，相当于短光径的比色皿？

还有，请你看一下http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100901/2755808/，有没有自动调光径长度的流动池比色皿？

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分
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tutm

第7楼2010/09/01

zwyu(zwyu) 发表:刚想说印象中C Technologies有一种可变光程的光纤探头，可查了一下，这个还是从tutm老师的帖子http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20090208/1726579/里知道的，呵呵

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tutm

第8楼2010/09/01

呵，我的想法有时可能出格，因为最近考虑在大范围变化的浓度测试问题，因此有此一问。谢谢！
夕阳(anping) 发表:tutm老师提出了个新颖的问题。我明白tutm老师提出这个问题的意义。如果这种透明的微量池可以转个90度使用，则避免了使用遮光板的麻烦。但是这种池子的内衬材料较厚，并且不清楚究竟是何种材料构成的。如果是玻璃的话，那在紫外区是不能使用的。
关于自动改变光径长度的比色池，我还从未听说过，孤陋寡闻了。

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gy409409

第10楼2010/09/02

好文章，开拓了我的思路。谢谢了。

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jink888

第11楼2010/09/02

很简单的问题,经过楼主的详细讲解和照片说明,是一篇很好的原创哦

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ygao1234

第12楼2010/09/03

赞赞赞，对我的工作也有很大的启发性

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