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【求助】新手使用紫外可见分光光度计的问题。

shelly009

2010/09/03

紫外可见分光光度计（UV）

厂里买了个thermo的 genesys 10s 的机器，
我不是很会用。因为手头没有标准溶液，就用葡萄糖溶解到纯水里想按说明书里的方法测一次浓度。
我的操作：
1.配了2个浓度的葡萄糖溶液： A:2.5g/l 和 B：10g/L, （我的初衷是：假设我的标液是A，测定B的浓度）
2.我把A放进了空白cell，（这机器有6个cell，1个空白，5个sample），B放进了1号cell。
3.不知道葡萄糖的吸收谱线==我就scan：190-1000nm，结果出来的波形图上有太多峰，不知道选择那个波长。后来看到好像200nm的时候突然掉下，我就选择了200nm。
4.选择波长200nm，用A做了空白，然后测量B。结果显示说超过什么range。。然后试了380nm 500nm 800nm的波长，都是一样出错。

请问我该如何设置和操作才能得到我想要的效果呢？==》假设标液是A，测定B的浓度

分
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shelly009

第1楼2010/09/03

在线等老师，可以加我的腾讯：448433566
十分感谢
shelly009(shelly009) 发表:厂里买了个thermo的 genesys 10s 的机器，
我不是很会用。因为手头没有标准溶液，就用葡萄糖溶解到纯水里想按说明书里的方法测一次浓度。
我的操作：
1.配了2个浓度的葡萄糖溶液： A:2.5g/l 和 B：10g/L, （我的初衷是：假设我的标液是A，测定B的浓度）
2.我把A放进了空白cell，（这机器有6个cell，1个空白，5个sample），B放进了1号cell。
3.不知道葡萄糖的吸收谱线==我就scan：190-1000nm，结果出来的波形图上有太多峰，不知道选择那个波长。后来看到好像200nm的时候突然掉下，我就选择了200nm。
4.选择波长200nm，用A做了空白，然后测量B。结果显示说超过什么range。。然后试了380nm 500nm 800nm的波长，都是一样出错。

请问我该如何设置和操作才能得到我想要的效果呢？==》假设标液是A，测定B的浓度

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叶子

第2楼2010/09/03

我不明白的是你为什么空白里放上A呢？

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shelly009

第3楼2010/09/03

我以为有个比值关系; C标：A标=C测：A测
叶子(xiaoanxiaoye) 发表:我不明白的是你为什么空白里放上A呢？

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鸿雁

第4楼2010/09/04

说明书里没有提到葡萄糖溶液的最大吸收波长吗？建议你还是找一个比较成熟的体系来检测你的仪器吧，比如邻二氮菲-铁体系，它的最大吸收波长在512nm,体系也比较稳定，可以用一下
shelly009(shelly009) 发表:厂里买了个thermo的 genesys 10s 的机器，
我不是很会用。因为手头没有标准溶液，就用葡萄糖溶解到纯水里想按说明书里的方法测一次浓度。
我的操作：
1.配了2个浓度的葡萄糖溶液： A:2.5g/l 和 B：10g/L, （我的初衷是：假设我的标液是A，测定B的浓度）
2.我把A放进了空白cell，（这机器有6个cell，1个空白，5个sample），B放进了1号cell。
3.不知道葡萄糖的吸收谱线==我就scan：190-1000nm，结果出来的波形图上有太多峰，不知道选择那个波长。后来看到好像200nm的时候突然掉下，我就选择了200nm。
4.选择波长200nm，用A做了空白，然后测量B。结果显示说超过什么range。。然后试了380nm 500nm 800nm的波长，都是一样出错。

请问我该如何设置和操作才能得到我想要的效果呢？==》假设标液是A，测定B的浓度

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360918249

第5楼2010/09/07

你应该设置葡萄堂的波长,标准上有的,应该是吸光度最大处吧

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tutm

第6楼2010/09/07

葡萄糖溶液直接测吸光度？好像没这样做的，糖类溶液对光吸收不明显，一般都要加显色剂的，比如酚类试剂。
一般糖溶液浓度的直接测试是使用折光仪，没有用分光光度计直接测试的。

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Jehovah

第7楼2010/09/07

因为A的浓度低，使用外标法，未知样品的吸光度应该在标准样品的最大浓度和最小浓度之间（有的仪器设定为不超出10%），否则测试的结果不可靠。所以有的仪器会告诉你超出范围。
你可以以B为标准来测A的浓度，采用单点过零做校准曲线（不过你要是只是学习还可以，一般标准曲线需要做5点，线性度相关因子大于0.999以上才可信）。另外，你的空白应该是试剂，不知道你的仪器中的2-6是否直接扣除1号空白？如是，请在1号池中放入空白（纯水）。

另外一个注意事项，最好检查一下你的不同的比色皿的吸光度误差。

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