表1 正交试验因素水平表
Tab.1 Test factor of orthogonal in level table
水平 | 因素 | |||||
A | B | C | D | E | F | |
萃取温度 | 萃取时间 | 搅拌速度 | 解吸温度 | 解吸时间 | 洗涤时间 | |
/℃ | /min | /rpm | /min | /℃ | /s | |
1 | 30 | 10 | 200 | 1 | 100 | 0 |
2 | 35 | 20 | 300 | 2 | 140 | 1 |
3 | 40 | 30 | 400 | 3 | 180 | 2 |
4 | 45 | 40 | 500 | 4 | 220 | 3 |
5 | 50 | 50 | 600 | 5 | 260 | 4 |
表2 六因素五水平正交试验数据表
Tab.2 The test data of orthogonal of six factors in five-level list
A | B | C | D | E | F | ||
因素 | 萃取温度 | 萃取时间 | 搅拌速度 | 解吸时间 | 解吸温度 | 洗涤时间 | 结果 |
/℃ | /min | /rpm | /min | /℃ | /s | ||
1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1590 |
2 | 1 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 1464 |
3 | 1 | 3 | 3 | 3 | 3 | 3 | 2468 |
4 | 1 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 2619 |
5 | 1 | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 | 2870 |
6 | 2 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 1918 |
7 | 2 | 2 | 3 | 4 | 5 | 1 | 2278 |
8 | 2 | 3 | 4 | 5 | 1 | 2 | 2037 |
9 | 2 | 4 | 5 | 1 | 2 | 3 | 2454 |
10 | 2 | 5 | 1 | 2 | 3 | 4 | 2355 |
11 | 3 | 1 | 3 | 5 | 2 | 4 | 1662 |
12 | 3 | 2 | 4 | 1 | 3 | 5 | 1979 |
13 | 3 | 3 | 5 | 2 | 4 | 1 | 3003 |
14 | 3 | 4 | 1 | 3 | 5 | 2 | 2574 |
15 | 3 | 5 | 2 | 4 | 1 | 3 | 2460 |
16 | 4 | 1 | 4 | 2 | 5 | 3 | 1466 |
17 | 4 | 2 | 5 | 3 | 1 | 4 | 976 |
18 | 4 | 3 | 1 | 4 | 2 | 5 | 1075 |
19 | 4 | 4 | 2 | 5 | 3 | 1 | 2354 |
20 | 4 | 5 | 3 | 1 | 4 | 2 | 1920 |
21 | 5 | 1 | 5 | 4 | 3 | 2 | 1394 |
22 | 5 | 2 | 1 | 5 | 4 | 3 | 1662 |
23 | 5 | 3 | 2 | 1 | 5 | 4 | 1255 |
24 | 5 | 4 | 3 | 2 | 1 | 5 | 1528 |
25 | 5 | 5 | 4 | 3 | 2 | 1 | 1982 |
K1 | 11011 | 8030 | 9356 | 9198 | 8591 | 11207 | |
K2 | 11042 | 8359 | 9451 | 9816 | 8737 | 9336.25 | |
K3 | 11678 | 9938 | 9856 | 9918 | 10550 | 10358.34 | |
K4 | 7891 | 11529 | 10083 | 9926 | 11122 | 8867 | |
K5 | 7821 | 11587 | 10697 | 10585 | 10443 | 9470 | |
2202.200 | 1606.000 | 1871.200 | 1839.600 | 1718.200 | 2241.400 | ||
2208.400 | 1671.800 | 1890.200 | 1963.200 | 1747.400 | 1867.250 | ||
2335.600 | 1987.600 | 1971.200 | 1983.600 | 2110.000 | 2071.667 | ||
1578.200 | 2305.800 | 2016.600 | 1985.200 | 2224.400 | 1773.400 | ||
1564.200 | 2317.400 | 2139.400 | 2117.000 | 2088.600 | 1894.000 | ||
R | 771.400 | 711.400 | 268.200 | 277.400 | 506.200 | 468.000 |
表3 方差分析表
Tab.3 Variance analysis table
因素 | 偏差平方和 | 自由度 | F比 | F临界值 | 显著性 |
萃取温度 | 2811488.240 | 4 | 12.040 | 4.110 | * |
萃取时间 | 2274397.040 | 4 | 9.740 | 4.110 | * |
搅拌速度 | 233504.240 | 4 | 1.000 | 4.110 | |
解吸时间 | 193887.040 | 4 | 0.830 | 4.110 | |
解吸温度 | 1055206.640 | 4 | 4.519 | 4.110 | * |
洗涤时间 | 693184.557 | 4 | 2.969 | 4.110 | |
误差 | 233504.24 | 4 | |||
总和 | 7495171.997 | 28 |
belle2001
第4楼2010/09/13
摘要：探索利用正交试验设计法优化固相微萃取条件，并建立固相微萃取-气质联用检测葡萄中百菌清残留量的检测方法。对试验中固相微萃取过程的影响因素：萃取时间、解吸温度、搅拌速度等进行正交试验设计，通过直观分析和方差分析区分了主次因素，确定了最佳操作条件：萃取温度40℃；萃取时间40min；搅拌速度600rpm；解吸时间5min；解吸温度220℃；洗涤时间0s。在此最佳条件下测定百菌清的线性范围为5-200μg/kg，检出限为0.12μg/kg，回收率在71.2%~116.9%之间，精密度在4.3%~10.7%之间。该试验方法简单，操作方便，满足测定葡萄样品中百菌清的实际需要。
关键词：正交试验；固相微萃取；百菌清；气质
葡萄，属落叶藤本植物。葡萄含糖量高达10%-30%，以葡萄糖为主，易被人体吸收。葡萄中的大量果酸有助于消化，适当多吃些葡萄，能健脾和胃。把葡萄制成葡萄干后，糖和铁的含量相对较高，是妇女、儿童和体弱贫血者的滋补佳品。全世界葡萄的栽培面积和总产量在各种果树中都位居首位[1]。2007年以来，在政府的大力扶持下，太仓市连续举办了四届葡萄节，其中有一大批产品在全国、省、市评比中屡获金奖、银奖和最佳风味奖、最佳外观奖，有些基地还制订了葡萄生产标准并积极申报绿色食品、无公害食品。葡萄种植已成为太仓市农业的特色产业，为进一步提高产品质量，把太仓葡萄品牌推出国门，研究快速、准确的检测方法迫在眉睫。
由卫生部、农业部组织制定的GB 25193-2010《食品中百菌清等12种农药最大残留限》，自2010年11月1日起实施，各检测机构纷纷开始着手准备。百菌清英文通用名称chlorothalonil，商品名称百菌清、敌克等。纯品为无色结晶，熔点250-251℃[2]，微溶于水，溶于二甲苯和丙酮等有机溶剂。百菌清是1965年开始使用的一种保护性杀菌剂，对人、畜的急性毒性低[2]。主要防治葡萄炭疽病、白腐病等病害[1]。美国国家环境保护总署(U.S.EPA)已经把百菌清列为可能使人类致癌的物质之一，因其对环境和食品安全具有潜在威胁[3]。目前，国内主要采用NY/T 761-2008[4]和S/N 2320-2009[5]的方法检测百菌清。上述方法样品前处理复杂、耗时、成本高、取样量大，不适合大量样品的快速检测，因此建立一种操作简便、快速和检测通量大的方法具有重要意义。
固相微萃取是1987年加拿大的Pawliszyn等[6]首先研制出并应用于检测的一种新型的萃取方式。运用固相微萃取法对葡萄中农药残留进行检测目前国内尚未有报道，而应用该法测定水果和蔬菜中农药残留已有一些研究[7-9]。由于影响固相微萃取效果的因素较多，合理选择试验设计方法可以提高试验效率、优化实验条件。本实验尝试将正交试验方法应用于固相微萃取-气质联用法测定葡萄中百菌清残留量。以求用较少的试验次数，又能反映各因素水平对萃取效果的影响，找到最优的试验条件。
1.3 实验方法
1.3.1 正交试验设计 参考A．Sanusi、谢文明和田孟魁等的研究方法[7-12]，在预备试验中，对萃取温度、萃取时间、搅拌速度、解吸温度等因素分别进行了单因素筛选试验，选出每个因素中较好的5个水平，采用L25(56)表安排正交试验，以目标物峰面积作为统计分析评价指标。各因素水平见表1
表1 正交试验因素水平表
Tab.1 Test factor of orthogonal in level table
水平 | 因素 | |||||
A | B | C | D | E | F | |
萃取温度 | 萃取时间 | 搅拌速度 | 解吸温度 | 解吸时间 | 洗涤时间 | |
/℃ | /min | /rpm | /min | /℃ | /s | |
1 | 30 | 10 | 200 | 1 | 100 | 0 |
2 | 35 | 20 | 300 | 2 | 140 | 1 |
3 | 40 | 30 | 400 | 3 | 180 | 2 |
4 | 45 | 40 | 500 | 4 | 220 | 3 |
5 | 50 | 50 | 600 | 5 | 260 | 4 |
表2 六因素五水平正交试验数据表
Tab.2 The test data of orthogonal of six factors in five-level list
A | B | C | D | E | F | ||
因素 | 萃取温度 | 萃取时间 | 搅拌速度 | 解吸时间 | 解吸温度 | 洗涤时间 | 结果 |
/℃ | /min | /rpm | /min | /℃ | /s | ||
1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1590 |
2 | 1 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 1464 |
3 | 1 | 3 | 3 | 3 | 3 | 3 | 2468 |
4 | 1 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 2619 |
5 | 1 | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 | 2870 |
6 | 2 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 1918 |
7 | 2 | 2 | 3 | 4 | 5 | 1 | 2278 |
8 | 2 | 3 | 4 | 5 | 1 | 2 | 2037 |
9 | 2 | 4 | 5 | 1 | 2 | 3 | 2454 |
10 | 2 | 5 | 1 | 2 | 3 | 4 | 2355 |
11 | 3 | 1 | 3 | 5 | 2 | 4 | 1662 |
12 | 3 | 2 | 4 | 1 | 3 | 5 | 1979 |
13 | 3 | 3 | 5 | 2 | 4 | 1 | 3003 |
14 | 3 | 4 | 1 | 3 | 5 | 2 | 2574 |
15 | 3 | 5 | 2 | 4 | 1 | 3 | 2460 |
16 | 4 | 1 | 4 | 2 | 5 | 3 | 1466 |
17 | 4 | 2 | 5 | 3 | 1 | 4 | 976 |
18 | 4 | 3 | 1 | 4 | 2 | 5 | 1075 |
19 | 4 | 4 | 2 | 5 | 3 | 1 | 2354 |
20 | 4 | 5 | 3 | 1 | 4 | 2 | 1920 |
21 | 5 | 1 | 5 | 4 | 3 | 2 | 1394 |
22 | 5 | 2 | 1 | 5 | 4 | 3 | 1662 |
23 | 5 | 3 | 2 | 1 | 5 | 4 | 1255 |
24 | 5 | 4 | 3 | 2 | 1 | 5 | 1528 |
25 | 5 | 5 | 4 | 3 | 2 | 1 | 1982 |
K1 | 11011 | 8030 | 9356 | 9198 | 8591 | 11207 | |
K2 | 11042 | 8359 | 9451 | 9816 | 8737 | 9336.25 | |
K3 | 11678 | 9938 | 9856 | 9918 | 10550 | 10358.34 | |
K4 | 7891 | 11529 | 10083 | 9926 | 11122 | 8867 | |
K5 | 7821 | 11587 | 10697 | 10585 | 10443 | 9470 | |
2202.200 | 1606.000 | 1871.200 | 1839.600 | 1718.200 | 2241.400 | ||
2208.400 | 1671.800 | 1890.200 | 1963.200 | 1747.400 | 1867.250 | ||
2335.600 | 1987.600 | 1971.200 | 1983.600 | 2110.000 | 2071.667 | ||
1578.200 | 2305.800 | 2016.600 | 1985.200 | 2224.400 | 1773.400 | ||
1564.200 | 2317.400 | 2139.400 | 2117.000 | 2088.600 | 1894.000 | ||
R | 771.400 | 711.400 | 268.200 | 277.400 | 506.200 | 468.000 |
表3 方差分析表
Tab.3 Variance analysis table
因素 | 偏差平方和 | 自由度 | F比 | F临界值 | 显著性 |
萃取温度 | 2811488.240 | 4 | 12.040 | 4.110 | * |
萃取时间 | 2274397.040 | 4 | 9.740 | 4.110 | * |
搅拌速度 | 233504.240 | 4 | 1.000 | 4.110 | |
解吸时间 | 193887.040 | 4 | 0.830 | 4.110 | |
解吸温度 | 1055206.640 | 4 | 4.519 | 4.110 | * |
洗涤时间 | 693184.557 | 4 | 2.969 | 4.110 | |
误差 | 233504.24 | 4 | |||
总和 | 7495171.997 | 28 |
雾非雾
第10楼2013/02/10
应助达人2012年中国农药大宗产品市场盘点——百菌清
百菌清走出低迷
1962年，美国大祥公司（Diamond Shamrock Co.）发现了百菌清，并于20世纪70年代先后建立了两套3,000t/a的生产装置，所以百菌清也是一个拥有50年历史老产品。目前，美国、日本、意大利和韩国等均有百菌清生产，国外生产企业包括先正达、意大利的Vischim公司和日本的SDS生物技术公司等。20世纪80年代初，我国云南省化工研究所开始研究百菌清，1984年原化学工业部主持并通过了技术鉴定和基础设计的审查，并于1989年建立了100吨/年百菌清（96%）生产中试装置，从此开始了百菌清在国内的生产。
百菌清是一个保护性的杀菌剂，不像其它治疗性杀菌剂那样容易产生抗药性，它的市场相对比较稳定，不会有大的波动。2011年，百菌清全球销售额同比增长8.8%，达到3.1亿美元，主要分布在美国、日本、法国和巴西等4个高端市场，这4个市场占整个市场50%以上的份额。百菌清主要用于经济类作物，如蔬菜、水果、马铃薯等，其次用于大宗作物，如谷物和水稻等；工业上也用作涂料、电器、皮革、纸张和布料等的防霉剂。百菌清全球的需求总量约为2万吨（原药）。而同行业的产能已超过3万吨，其中主要的生产企业是先正达，其产能为9,000吨；国内企业目前的产能也已达到了2.5万吨，而国内的市场需求量仅为3,000吨制剂（折合原药为2,000吨）左右，因而国内企业的产能主要还是依靠出口来释放。2011年全年总出口量约1.35万吨，其中原药占80%，在1.1万吨左右，制剂不足3,000吨。2012年1～7月，百菌清出口量为约为9,000吨，其中原药为6,000多吨，制剂仅为2,000多吨（折百）。据中国农药工业协会统计，2012年1-10月累计产量8651.26 吨（折百量），累计销售7965.99吨。
2010年中期，大的百菌清生产企业只有3家，分别为江苏新河农用化工有限公司、江阴苏利化学有限公司和山东大成农药股份有限公司，非法生产企业较多。
从2011年开始，百菌清的价格竞争比较激烈，价格一路走低，主要原因是，国内一些非法企业在用小装置进行生产，导致一是把价格拉下来，二是市场上出现了非法竞争。但要生产好的百菌清，需要有连续化装置，才能取得稳定的产量和质量。
由于百菌清的原材料受石油价格的影响很大，导致生产成本增加；另一方面百菌清的价格在下滑，目前稳定在2.6万元左右。但同时也有有利因素，当前国内百菌清扩产的趋势得到控制，预计价格将会上涨，市场将走出低迷态势。
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