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【讨论】SDS-PAGE 制胶时胶面弯曲不平会是什么原因

电泳仪

  • 最近在跑SDS-PAGE时,老是遇到这种情况,如图示:
    分离胶凝固后,把水层倒掉,发现胶面不是以前那种很直的一条水平线,而是弯弯曲曲的,而且分离胶的底部有一小段老是凝不上,从制胶架上取下后底部那段直接流下来,就是液体,所有的储备液都重新配了,APS也是现配的,也混匀了,可是还是老样子,都重复N多次了,也不知道是什么原因,一样的操作,想想以前也没有遇到过这种问题,只犯晕,大家有碰到这种现象啊?
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  • dong3626

    第1楼2010/09/16

    应助达人

    把胶板仔细清洗干净,还有就是密封垫圈,看看是否放置的恰当。

    胶配制过程再检查下看有没有问题。

    加入浓缩胶之后,在上面加入一些水或者异丙醇,轻轻的磕下胶板在桌面上,这样胶面就会比较平。。

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  • wxhxz

    第2楼2010/09/16

    谢谢您的回复!
    我也怀疑过胶板没洗干净,后来胶板用洗洁精洗后,水冲干净还是不行,也没发现漏液的现象,水封之后轻轻晃过的,以前不太在意随便搞搞也都一切OK了,现在谨小慎微,唉自己能想到的都试过了,可是...

    dong3626(dong3626) 发表:把胶板仔细清洗干净,还有就是密封垫圈,看看是否放置的恰当。

    胶配制过程再检查下看有没有问题。

    加入浓缩胶之后,在上面加入一些水或者异丙醇,轻轻的磕下胶板在桌面上,这样胶面就会比较平。。

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  • tcwenchen

    第3楼2010/12/03

    底部的缺是凝胶导致的,每次都会有(至少我用bio-rad电泳仪会有,用胶条密封的都会有,六一的由于用的是橡胶环密封,貌似没有)其实page叫凝固时体积变小很容易观察到,楼主制分离胶时用异丙醇或水压,不一会儿就会发现水的液面下降,一般也会认为这是胶凝集的预兆;

    至于楼主的上端:个人认为有三种影响原因,但都是应为胶凝的太快了,还来不及压平就凝固了。可能是因为楼主制胶体系里边APS加的太多了(这东西导致胶的凝集),TEMED(助凝剂)太多,或者制胶时温度过高也会加速胶的过早凝集。

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  • dong3626

    第4楼2010/12/04

    应助达人

    楼上回答的有道理。。
    凝胶速度过快确实会造成这样的结果

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  • renmeng88711

    第5楼2012/01/12

    你是用水封还是用的有机溶剂啊 加水时 慢点加就行 加的快的话 容易出现上述情况 另外 还有就是你的胶版好像不太密封 洗干净 先夹好 测漏不漏 20min吧 然后再配胶 配胶时要混匀

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