【讨论】HILIC色谱柱的方法开发及经验交流（附HILIC使用方法）

抛砖引玉

前言：
平日我常常都要使用HILIC色谱柱与其他色谱柱进行分离性能的对比。
久而久之，突然发觉现在使用HILIC柱的方法真是越来越多啊！
暮然回首，我的色谱柱的柜子里已经堆满了HILIC，而C18 只是被挤在了小角落里。
难道现在全球的研究方向已经突然转向了。。。。

赶紧连夜发帖与亲爱的液质版网友讨论。看看大家意见怎样？
顺便把自己使用HILIC的新的献上，起到抛砖引玉的作用。

1. 一直使用Waters 的HILIC较多，感觉质量还行，但是要小心waters 的HILIC是分两种类型的填料的 BEH HILIC和 HILIC。
很多waters 的销售都不清楚之一点。但是大家一定要注意，这两款的区别是很大的，保留的效果是不同的。

2. 费罗门公司的HILIC柱，感觉是小家碧玉型的，保留能力不是太强，但是清秀文雅， 峰型很好看。

3. HILIC的 流动相推荐使用乙腈。以后给大家细说。

4. 推荐使用乙酸铵， 这也以后再说。

5.不能使用100% 的乙腈，推荐使用到95%就行了。
不能使用60%一下的乙腈。
所以梯度范围小。但是足够用了。

我们基本上两三天就用一次，做三聚氰胺和三聚氰酸，偶尔做一下链霉素。百草枯等。型号是waters的。感觉很稳定的。每次用完都用50%的乙腈水清洗一下，最后换成90%的乙腈水保存。

你用它来做百草枯，是否可以告诉一下流动相的比例，母离子，子离子，谢谢啦！

提供MRM条件

举例：
Parathion CAS 56-38-2 C10H14NO5PS 母离子 291.033
ESI+
母离子 子离子 CV CE
291.9 236 30 14
291.9 110 30 33

UPLC条件
0min 2%甲醇+0.1%FA ————10min 100%甲醇

色谱柱 ：waters UPLC BEH C18 （2.1*100mm，1.7um） 流速0.45ml/min
柱温 40度

出峰时间 6.44min

为什么不能用甲醇呢？为什么不能用100%乙腈呢？
希望得到解答。谢谢

因为100%的乙腈可能对HILIC的中亲水的部分不利于键合相的伸展开。
使得保留性能下降。其中的解释也是经验，研究论文解释的也让人不太信服。所以大家可以一起讨论一下这点。

使用甲醇的问题也是这样的。在甲醇分子附近，HILIC的保留能力下降了，色谱峰型较差。
这也是经验结果。

现在这个领域的研究还是很热的。
比如使用电镜技术观察，HILIC填料在不同溶剂中的结构形态。

弱弱的问一下：我只用HILIC柱子做过三聚氰胺，但是三聚氰胺好像是非极性的呀！这不是和你对HILIC下的定义不符合吗？
亲水色谱（HILIC）是一种用来改善在反相色谱中保留较差的强极性物质保留行为的色谱技术。它通过采用强极性固定性，并且结合高比例有机相/低比例水相组成的流动相来实现这一目的。

三聚氰胺性状为纯白色单斜棱晶体，不可燃，无味，低毒，密度1.573g/cm3 (16℃)。常压熔点354℃，急剧加热则分解；快速加热升华，升华温度300℃。在水中溶解度随温度升高而增大,在20℃时，约为3.3 g/L，即微溶于冷水，溶于热水，极微溶于热乙醇，不溶于醚、苯和四氯化碳，可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等。

可能是样品的原因，我们用HILIC比较少，主要是费罗门的，一般用在对于C18不容易保留的化合物上，流动相主要也是乙腈，在用的过程中发现的主要问题就是色谱柱很难平衡，通常用流动相平衡半小时还需要进空白样品才能完全平衡住，对流动相的要求貌似更苛刻。