谁知道

从胶上切下用于酶解的体积尽可能小的胶带，随后再将胶切成约1mm3的小块放于小离心管中。下面的步骤是根据Wilm等人发表的方法而来的。用100mM碳酸氢氨(一个2D胶斑点~50ul)洗胶块5min，之后除去缓冲溶液，加50ul乙腈并使胶脱水10-15min。如果胶块没有完全脱水就需要再换一次乙腈，最后倾出乙腈，在Speed-Vac 中完全干燥（在低温状态~15min）,用50ul含有10mMDTT的100mM碳酸氢氨溶液（新鲜配置）再水化胶,在56℃下加热30min还原样品，之后倾出DTT溶液，加乙腈于胶中15min后在Speed –Vac 中干燥（低温 15min），加50ul含有55mM碘乙酰胺的100mM碳酸氢氨溶液烷基化半胱氨酸残基，避光在室温下放置20min，弃去上清液用100mM的碳酸氢胺缓冲液冲洗，然后换用新的碳酸氢胺缓冲液洗15min,如果这一步还不能完全脱色，需用100mM碳酸氢氨：乙腈1:1的溶液在37℃振摇30min，重复此步骤直到完全脱色。倾出液体加入50ul的乙腈约15min后，在Speed-ac 中干燥,再在50mM包含测序级胰酶的碳酸氢氨溶液中再水化。酶的储存液是在25ug的胰酶中加250ul的0.1%三氟乙酸。每份(15ul)被储存在4℃下。活性酶溶液的制备是每份15ul加100ul的50mM碳酸氢胺溶液,终浓度是13ng/ul.。加入约20ul的胰酶溶液于胶块中（充分再水化后的胶块）并放置在4℃下再水化45-60min，移走过量的胰酶溶液加入少量的 50mM的碳酸氢胺溶液(10-20ul)使胶块在酶解过程中保持浸润，在37℃孵育1小时，然后在室温下过夜。