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【第三届原创参赛】样品重现性差和残留问题的排查和解决过程

leraine

2010/11/09

液质联用（LCMS）

[1102] 维权声明：本文为leraine原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现的，均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

Part1: 仪器信息

Waters HPLC-MS 分析+纯化系统：2767自动进样器（含组分收集器），2998PDA检测器，2424ELSD检测器，515补充泵，二元溶剂管理器，样品管理器，SQD质谱检测器；

Part2: 使用问题

关于样品重现性和残留的问题：

问题1：连续进样，紫外响应重现性差，RSD值远大于15%，在不可接受范围内；

问题2：连续进样后，进一针空针，还是有样品峰在其保留位置出现，而且残留的量挺大且不规律，时高时低；

Part3：排查过程

先弄清楚样品从进样针进样后走的流路，分段逐个排查可能堵塞、漏液的地方；从自动进样器到管路到分析柱，到流通阀到紫外检测器，到质谱和ELSD检测器；

先看一下waters2767自动进样器：

进样器+预柱+柱子+紫外检测器重现性较差，有残留

进样器+预柱+紫外检测器重现性较差，有残留

进样器+柱子(sunfire）+紫外检测器重现性较差，有残留

进样器+柱子(x-bridge）+紫外检测器重现性较差，有残留

进样器+紫外检测器重现性较差，有残留

用制备的进样口进样+紫外检测器重现性好，无残留

因此可以基本认定是进样器分析口堵塞问题，拆开进样器六通阀，其上有20ul的分析定量环，还有洗针液的废液排出管道等，需要卸下5个螺钮（英制内六角），前边一半是定子，后面一半是转子，六通阀整体是个通路，超声不对造成危害，因此在清水中超声20min清洗六通进样阀，发现定子和转子上均有一个较明显的划痕，可能是进的一些不易溶的样品在定子转子中间磨损造成的划痕，换上新的定子和转子后，再走标准品，重现性仍然较差，但残留问题已经解决，即重复进样后进空针，谱图干净，在原来的保留时间下无响应；

清洗好六通阀后，用注射器从进样口推打液体，发现并未从应该流出的小孔里流出，只有少量从小孔中流出，大量都从进样口两侧漏出，为不完全堵塞；对工程师带来的新的六通阀做同样的实验，液体全部从小孔中喷出，进样口两侧没有任何漏液的现象；

换上新的六通阀和定子转子后，prime系统，洗针：

Full loop进样模式下，建议用overfill factor>3，不选择center in loop；

Partial loop进样模式下，用20%-50%定量环体积即10ul左右，而且要一定选择 center in loop，保证全部进样；

在这两种模式下，连续进样5针caffine，重现性较好，算RSD值分别是0.5%和0.8%；

Part4：总结

这个重现性和残留的问题应该算是实验室经常会遇到的问题，说大不大说小不小，这个排查问题和解决的过程需要耐心，尤其对于实验室一些很重要的样品必须把损失降到最低，所以要求仪器一定要在最正常的状态下做实验；最后对于操作者来说需要注意以下几点：

1．每次做第一个样品之前，要prime整个进样管路，清洗进样针及针孔；强洗弱洗的溶液都必须超声过，防止气泡进入针内对样品吸入的量造成不准；

2．对样品的配制和性质严格把关，对于不易溶或者根本不溶解的样品尽量不采用液质分析；这次出现定子转子划痕和进样器不完全堵塞也是因为一个特殊的样品，它在DMSO下溶解，但是只要一遇到水或者甲醇、乙腈就会析出，送样人样品浓度过大等原因；

3．预柱是不能超声清洗的，里面也是有填料的，可以反冲或者卸掉分析柱用大流速冲洗；

4．进一步熟悉仪器的构造，提高分析能力；

PS.希望大家多多提出意见和建议，广泛交流，共同进步~
悄悄许个愿：苏泊尔巧叠6套装锅

分
该帖子已被版主-新窦加15积分，加2经验;加分理由:参与奖

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happy爱米粒

第1楼2010/11/09

问题二残留的现象我们也遇到过，呵呵，感谢楼主提供了一个不错解决问题的思路

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leraine

第2楼2010/11/09

嗯，是，据工程师说定子转子的更换频率还是蛮高的；其实最有意思的就是排查的过程...
xgy2005(xgy2005) 发表:问题二残留的现象我们也遇到过，呵呵，感谢楼主提供了一个不错解决问题的思路

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冷冷的冰雨

第3楼2010/11/09

学习了，楼主的总结讲的很好

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zhc609

第4楼2010/11/10

顶一下。学习了。

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青林

第5楼2010/11/13

那维护的成本是不是会很高啊
leraine(leraine) 发表:嗯，是，据工程师说定子转子的更换频率还是蛮高的；其实最有意思的就是排查的过程...

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netsking

第6楼2010/11/14

谢谢分享，十分感谢。已经加入收藏.

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leraine

第7楼2010/11/15

青林(wyqql2060) 发表:那维护的成本是不是会很高啊

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论坛版主招募|新窦

第8楼2010/11/15

很多残留情况都是出现在进样器上，也很是头痛。

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leraine

第9楼2010/11/16

尤其是这台纯化系统，2767的自动进样器在北京没有几台，所以工程师很紧缺，很多人都拿它没有办法，它的管路非常多，很复杂；
新窦(capinter) 发表:很多残留情况都是出现在进样器上，也很是头痛。

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frappuccino

第10楼2010/11/16

好像北京生命科学研究所有一台这个仪器。不知道是不是你们单位的。

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