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【讨论】远离EB和紫外,检测核酸有没有更好的选择

生命科学仪器综合讨论

  • 话说无论是初接触分子生物学的新手,还是久经考验的“老鸟”,都知道EB染料的有害性,这种有害性表现在三个方面:接触致癌性,紫外观测的诱变性,以及麻烦的后处理。但是要说到EB的替代品,好像又都不是那么合心意,比如SYBR类染料在紫外下不稳定,容易降解,一些像是GelRed之类的染料虽然毒性低,但是价格却不亲民。

    想要避免EB的影响,又不想影响实验的效果,许多实验人员常陷入两难中,另一方面,经典的凝胶成像系统一般都是采用的紫外成像,在这种波长下,EB的灵敏度和价格都是比较合适的,而其它的染料又存在不稳定性这一瓶颈式缺点,所以导致了虽然知道EB的有害性,但许多实验室还是采用EB染料的现状。

    国内生物技术自主研发着名企业:百泰克公司2009年推出了新一代的凝胶透射仪,可用于核酸和蛋白质电泳凝胶样品的观察、处理、分析和拍照。

    这种凝胶透射仪:UltraPowerTM采用的是可见光光源,如果配合新一代核酸染料UltraPowerTM或者其他花菁类荧光染料,可检测出几十pg的dsDNA,灵敏度比紫外凝胶透射仪配合EB染料高10-25倍。

    这是由于花菁染料具有摩尔吸收系数大和荧光量子产率高的优点,通过共轭链长度的调节,花菁的光谱可以从可见光区一直延伸到近红外区,采用红区测量可有效地排除背景干扰,获得更为理想的分析灵敏度和选择性。花菁染料的光谱对外界微环境的变化极为敏感,非常适合生物及环境样品的分析研究。

    除此之外,UltraPowerTM可见光凝胶透射仪还可以用于多数荧光染料,比如SYBR Green I、绿色荧光蛋白(EGPF)等(具体染料见附表)。这可以算得上是一套多色荧光成像分析系统,而且UltraPower可以采用普通数码相机拍照,从而摆脱了高昂造价得黑白CCD时代,可以拍出多姿多彩的电泳图片来。
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  • 果果

    第1楼2010/11/29

    UltraPowerTM可见光凝胶透射仪具体特点见下:

    1. 可见光激发 避免传统紫外激发时有可能对核酸样品造成的诱变和损伤,以至于克隆效率低下,甚至表达蛋白错误;

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    2. 实验操作安全 在非紫外的可见光下操作,实验操作人员更安全,真正杜绝了紫外对人皮肤的伤害;

    3. 切胶方便,不用暗箱 配备本公司自主研发的特质观察镜,既可清晰地分辨电泳条带,又能彻底摆脱传统切胶回收时空间狭小,操作不便的弊端(图1);

    4. 数码相机拍照,多彩亮丽 拍照更简便,效果更清晰;从此告别高昂造价的黑白CCD时代,普通数码相机就可拍出多姿多彩的电泳图片来(图2);

    5. 灵敏度更高 和传统紫外激发的EB染色相比,该产品和配套染料的灵敏度要高出8-20倍,能检测低至0。1ul的DL2000(相当于100pg)(图3、4、5)。




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