【讨论】在什么情况下需要考虑添加磷酸二氢钠和磷酸氢二钠

方法开发，当分离酸性或碱性样品时，需考虑加人缓冲剂控制流动相的pH值
磷酸二氢钠的pH范围是4.2-4.6，磷酸氢二钠9.1-9.4（50g/L,25℃），具体选择哪种缓冲剂应先了解被分析物的Pka，pH值高于或低于分析物Pka两个单位的值，有助于获得好的峰形（溶液PH值高于或低于分析物的pKa两个单位时，化合物99％以一种形式存在，而一种形式存在的化合物才能获得好的峰）

10一50mM浓度的缓冲剂对RPC分离一般足够（假定进样体积较小和/或样品对流动相PH的影响不很大）。较高的缓冲剂浓度(大于50mM)可以提供较大的缓冲容量,但在高%B的流动相中可能不溶；高浓度的缓冲剂也可能对不锈钢材质的HPLC系统操作不利。25mM的缓冲剂浓度通常是较好的折衷方案。