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【线上讲座】动物组织中盐酸克伦特罗(瘦肉精)测定的前处理过程(获奖名单已经公布,见4楼)

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  • 【线上讲座】动物组织中盐酸克伦特罗(瘦肉精)测定的前处理过程


    主讲人:abc_1982

    活动时间:2011年4月11日——4月25日

    热烈欢迎abc_1982在极限色谱柱版面和大家一起讨论瘦肉精的前处理过程!





    前言:
    克伦特罗:学名盐酸克伦特罗;分子式:C12-H18-Cl2-N2-O
    白色或类白色的结晶粉末,无臭、味苦,熔点161,溶于水、乙醇,微溶于丙酮,不溶于乙醚是一种平喘药。该药物既不是兽药,也不是饲料添加剂,而是肾上腺类神经兴奋剂。 
    瘦肉精的来历:
    在中国,通常所说的瘦肉精是指克伦特罗(它曾经作为药物用于治疗支气管哮喘,后由于其副作用太大而遭禁用),它可以增加动物的瘦肉量、减少饲料使用、使肉品提早上市、降低成本。在上世纪90年代,国内错误的把其作为饲料添加剂使用在猪饲料中,因此叫做瘦肉精”。但随着其明显的副作用显现, 轻则导致心律不整,严重一点就会导致心脏病,国际上已经禁止其使用在饲料中.我国也于1997年开始全面禁止使用




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  • 小卢

    第1楼2011/04/10


    无论什么样品的检测,其前处理的好坏直接影响到最后样品的检测结果。而对时下大家较为关注的“瘦肉精”问题,已经严重的影响到了大家的日常生活。对于瘦肉精检测的方法有酶联免疫吸附法(ELISA 、高效液相色谱法(HPLC[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱-质谱法[/url]GC-MS)三种,目前使用GC-MS较多,因为其检测限低,但这些方法的前处理过程是一样的。因此,今天我们将重点和大家一起分享“瘦肉精”检测的前处理过程。


    一.适用范围
    适用于动物肌肉和肝脏中盐酸克伦特罗药物检测的前处理过程。

    二.处理过程
    1.提取
    1.1 将5g动物组织、15 mL乙酸乙酯、3 mL10%碳酸钠溶液置于50 mL离心管中,10000 rpm均质2 min。6000 rpm下离心2 min,将上清液转至另一离心管中。用15 mL乙酸乙酯重复提取一次,合并提取液。
    1.2 向乙酸乙酯提取液中加入5 mL 0.1 mol/L的盐酸溶液,涡动1 min,然后再6000 rpm下离心1 min,收集下层水相。重复萃取一次,合并下层水相,用2.5 mol/L NaOH溶液调节pH至5.2,待净化。

    注意事项:
    剪样时,对于肌肉组织来说,需要将肌肉中的肌膜,脂肪除去干净;对于肝脏组织来说,需要将筋膜等去除。
    盐酸克伦特罗为弱碱性药物,在碱性条件下(pH-pKa>2)时,盐酸克伦特罗以分子形式存在,易溶于乙酸乙酯;提取的第一步中采用10%的Na2CO3溶液碱化基质,再用乙酸乙酯将其萃取出来;在第二个步骤中,通过加入5 mL的0.1M的盐酸溶液酸化基质,这时候盐酸克伦特罗以离子形式存在,更容易溶于水中,从而被反萃取到水溶中。

    2.
    净化
    2.1 活化/平衡:依次向Welchrom® P-SCX(60mg/3mL)中加入3 mL甲醇、3 mL水和3 mL 30 mmol/L盐酸溶液,流出液弃去;
    2.2 上样:将上述提取液加入柱中,流出液弃去;
    2.3 淋洗:依次用3 mL水、3 mL甲醇淋洗,淋洗液弃去,并将小柱抽干;


    2.4 洗脱:用2×2 mL 5% 氨化甲醇洗脱,收集洗脱液,40℃下氮气吹干。


    注意事项:
    上样时请注意控制流速,因为克伦特罗与吸附剂之间是离子作用力,这种作用力的形成需要时间,如果流速太快会导致保留不住,建议在重力作用下自流,如果加压,控制流速不超过1 mL/min。
    采用0.1M盐酸水溶液反萃完盐酸克伦特罗后,对于P-SCX小柱来说,可以不用NaOH溶液回调pH至5.2。因为方法参考的是NY/T 468-2006标准,原标准中采用的硅胶基质的强阳离子交换小柱,硅胶在pH 2-7.5之间稳定,而聚合物基质的P-SCX则在pH 1-14中均稳定存在。

    3.样品:
    用1ml50%甲醇溶解得到残渣,振荡1min使溶解,过0.22um尼龙针式滤膜,即得。


    附件:

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  • 小卢

    第2楼2011/04/10

    活动规则:
    1.提问可以以“请问######”、“我的看法是#######”“我对#######不是很明白”等形式进行
    2.对本次讲座有帮助的提供、讨论等均给予积分或实物的奖励,参与次数越多,获得奖励越多。

    奖励措施:
    1.参与讨论的版友均有1-5个积分奖励(灌水帖除外)
    2.按照参与回帖次数、质量,以及互动情况,
    实物奖励6-10名版友
    奖品为:
    笔记本电脑散热垫、精品杭州天堂伞
    如图:

    极限版面欢迎您参与!!!



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  • 小卢

    第3楼2011/04/10

    版友部分问题及回复汇总:

    1.问题:
    活化平衡时加入3 mL甲醇、3 mL水和3 mL 30 mmol/L盐酸溶液原理是什么呢,呵呵 没用过这种萃取柱 是一般步骤啊还是月旭本款小柱特有步骤
    答复:
    这个是一般步骤,甲醇的目的是活化,主要润湿柱体,同时也可以清洗掉小柱中可能存在的干扰物,后面的水和稀盐酸为平衡步骤,为后面的上样提供一个合适的环境。

    2.问题:在提取步骤,用氢氧化钠调节PH值,一般是采用什么设备来看PH 值,精度要求如何?
    回复:
    采用pH计就可以了,规定要求是调整到pH5.2的目的是因为在这个pH环境下,盐酸克伦特罗以阳离子形式存在,但是当pH低于5.2时,盐酸克伦特罗也以分子形式存在,故采用pH试纸监测pH也可以,这时可以将值适当的放低一点。

    3.问题:上样时,很难过柱,这是什么原因造成的?有哪些方法可以解决?[/quote
    答复
    :您说的很难过柱是指流速偏慢还是指堵柱子,如果是流速慢的话,可以给你负压,但是要控制流速,因为离子相互作用力的形成需要时间,所以流速不易太快。如果是堵柱子的话,那就可能是您样品的问题了。采用这个方法的话由于共萃取出来的脂类物质比较少,上样应该不存在这样的问题,请问你使用的是什么小柱,什么规格的。
    问题:谢谢老师 那么这个过柱子时的流速有没有个规定的或者是合适的范围呢
    答复:
    不同填料、不同的目标化合物、甚至你的上样量都与你选择的最终流速有关,对于反相来说,由于反相作用力较弱,更溶液形成,流速可以适当的快一点,一般流速在1-10 mL/min,具体的需要看您的上样量。对于离子交换来说,由于作用力的形成需要更长的时间,需要适当降低流速。

    4.问题:各位老师有做过饲料中 β—兴奋吗?这几天在做,根据农业部公告,上液质,用盐酸甲醇超声提取,离心后上清液过MCX小柱,氮吹后用流动相溶解上液质,外标法定量,可是回收率低得可怜呵。沙丁胺醇和克伦特罗回收率60-70%,莱克多巴胺只有24%。郁闷中,有做过的老师请指教啊
    回复:
    饲料的却是没有做过,可以先判断回收率低的原因,确定是哪一个步骤出了问题,再对症下药。液质的基质效应很强,考虑是否可能是基质效应引起的离子抑制。

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  • 小卢

    第4楼2011/04/10

    获奖版友公布:


    id 有效回帖
    ynsfeed 32


    junqiwudi 15

    apples 7

    coffee8 4

    arvid2007 2

    yxhuangchem 2



    请以上版友以站短或邮件的方式把具体的联系方式发给小s(samanthalas)或小卢,并说明你是选择电脑垫还是雨伞!
    同时也感谢iamquan 、
    jiang51 、naruto1988 三位版友对活动的支持,虽然此次未得奖,但可以继续参与版面的其它活动,获奖机会还有很多的,比如:“说出你的故事”、“极限体验”、“每月发帖奖励”等等。再此感谢您对我们活动的支持!

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  • yq771003

    第5楼2011/04/10

    小心谣言,避免上当

    luxw:关键是当时我们国家的研发能力太弱,没有及时发现它的副作用。但宣传也做的少,因此现在很多地方还在用!

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  • 该帖子已被版主-luxw加1积分,加2经验;加分理由:鼓励参与!我还没发完就开始回帖啦,呵呵
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  • 阿三

    第6楼2011/04/10

    为何要用乙酸乙酯 当初萃取溶剂选择是都试过哪几种啊

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  • 阿三

    第7楼2011/04/10

    活化平衡时加入3 mL甲醇、3 mL水和3 mL 30 mmol/L盐酸溶液
    原理是什么呢,呵呵 没用过这种萃取柱 是一般步骤啊还是月旭本款小柱特有步骤

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  • abc_1982

    第8楼2011/04/10

    这个是一般步骤,甲醇的目的是活化,主要润湿柱体,同时也可以清洗掉小柱中可能存在的干扰物,后面的水和稀盐酸为平衡步骤,为后面的上样提供一个合适的环境。

    阿三(junqiwudi) 发表:活化平衡时加入3 mL甲醇、3 mL水和3 mL 30 mmol/L盐酸溶液
    原理是什么呢,呵呵 没用过这种萃取柱 是一般步骤啊还是月旭本款小柱特有步骤

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  • 阿三

    第10楼2011/04/10

    水是为了洗掉甲醇为稀盐酸过渡吗

    abc_1982(abc_1982) 发表:这个是一般步骤,甲醇的目的是活化,主要润湿柱体,同时也可以清洗掉小柱中可能存在的干扰物,后面的水和稀盐酸为平衡步骤,为后面的上样提供一个合适的环境。

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