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【分享】总黄酮的提取和测定

去年冬天

2011/04/21

化学药检测

实验原理

黄酮类化合物是植物的重要次生代谢产物，也是一些保健品和中药材的有效成分之一。黄酮类化合物的定量方法常用的有HPLC法和分光光度法，在实际生产和科研过程中，对于黄酮单体的定量常采用HPLC法，而对总黄酮的测定，考虑到方法的简便、快捷以及可行性，多采用在碱性介质中加铝盐显色的分光光度法。在碱性条件下黄酮类化合物与铝盐形成络合物、在500nm波长处有最大吸收峰。标准品选用芦丁。

试剂和器材

一、试剂

芦丁标准品。

5％NaNO2；10%A1(NO3)3；5％NaOH；70％乙醇。

二、材料

新鲜银杏叶。

三、器材

容量瓶10ml（×7），25ml（×1），100ml（×2）；吸管 0.5ml（×2），1ml（×2），2ml（×1），5ml（×1）；分光光度计。

操作方法

一、制作标准曲线

精密称取芦丁标准品5mg，用70％乙醇溶解，定容于25mL容量瓶中，摇匀，得0．2mg／mL的标准溶液。

精确吸取标准溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL，分别置于10mL容量瓶中，加入 5％NaNO20.4mL，摇匀，放置6min；加入10%A1(NO3)3 0.4mL，摇匀，放置6min；加入5％NaOH4.0mL，再加水至刻度，摇匀，放置15min。以试剂空白作为参比溶液。用1cm比色皿，在500nm波长处测定吸光度，绘制标准曲线。

二、总黄酮的提取

把新鲜的银杏叶低温烘干，使水分小于8％，制成干粉。精确称取干粉1．0g，置于 100mL容量瓶中，加入70％乙醇30mL，浸泡24h。超声波提取30min，过滤，滤液用70％乙醇定容于100mL容量瓶中，得到黄酮提取液，待用。
三、测定
吸取黄酮提取液1.00mL, 置于10mL容量瓶中，加入5％NaNO30.4mL，摇匀，放置6min；加入10%A1(NO3)3 0.4mL，摇匀，放置6min；加入5％NaOH4.0mL，再加水至刻度，摇匀，放置15min。以试剂空白作为参比溶液。用1cm比色皿，在500nm波长处测定吸光度，由标准曲线法计算总黄酮含量。
注意事项

对于某些热敏成分的提取，采用超声波破碎法效果较为理想。由于此过程是一个物理过程，浸提过程中无化学反应，被浸提的生物活性物质在一定时间内保持不变。

分
该帖子已被版主-青林加2积分，加2经验;加分理由:话题不错

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wufenyut

第1楼2011/04/21

用紫外分光光度法测定总黄酮是一个方法，但是用HPLC测定是否更准确呢！

0

yuduoling

第4楼2011/04/21

学习一下高手的做法

0

小木

第5楼2011/04/22

对于HPLC而言，测定指定的物质可以，但是要测总黄酮还是有些不妥，虽然用紫外法有一定的颜色干扰，但是个人觉得这种方法还是到目前为止，比较好的一种方法。
wufenyut(zuochxue) 发表:用紫外分光光度法测定总黄酮是一个方法，但是用HPLC测定是否更准确呢！

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coffee8

第6楼2011/04/22

我们也是用的这种方法，是测蜂胶中的总黄酮
小木(haoyuaimama) 发表:对于HPLC而言，测定指定的物质可以，但是要测总黄酮还是有些不妥，虽然用紫外法有一定的颜色干扰，但是个人觉得这种方法还是到目前为止，比较好的一种方法。

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神话

第7楼2011/04/23

液相方法会相对的复杂些

0

青林

第8楼2011/04/24

在不影响到试验结果的前提下，没必要增加成本！
wufenyut(zuochxue) 发表:用紫外分光光度法测定总黄酮是一个方法，但是用HPLC测定是否更准确呢！

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xiaowang268

第9楼2011/11/07

楼主辛苦了啊

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zhaohua8011

第10楼2011/11/14

不错的资料，谢谢了

0

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