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【求助】HPLC 流动相检测相关问题,请教大家!!!

  • liuhaaitao3592
    2011/05/27
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 关于流动相配制问题

    各位大侠好。
    本人现在在用HPLC-ECD检测6-OHDA,流动相是:25mM柠檬酸,125mM磷酸钠(文献中写的是sodium phosphate),100mg/lEDTA,30mg/lSOS,配置好后用磷酸调节pH至2.5(我们实际操作中,比2.5高).

    现有问题如下:

    1.关于pH:我第一次检测的时候,调节pH至3.5,但是出峰时间随着时间的进行也向后推移了,而且是每进一针都向后退0.1-0.2分钟,推测可能是由于pH变化导致的,于是3天后又测那瓶流动相的pH为3.8,又过了三天再测变为4.2.可是我第二次测时候,当天做完实验测得pH值和我第二天早上测得pH值几乎没有变化!于是我又迷茫了!莫名奇妙。于是又找其他原因。

    2.我用sodium phosphate,瓶子上写的是这个,但是化学式是磷酸二氢钠。但是就缓冲对来说,是不是没有太大影响?另外在配置流动相的时候有没有什么注意事项?比如操作有没有什么规定?(我是先放柠檬酸,再放磷酸二氢钠,然后让EDTA,最后放SOS,倒入蒸馏水定容至1升,然后调节pH,不知道是不是操作有问题?)多谢!!
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  • 有水有渝

    第1楼2011/05/27

    应助达人

    流动相配制好后不应该稳定性这么差的,测定过一天之内的流动相PH变化情况吗?

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  • jhylc1976

    第2楼2011/05/27

    我觉得:关键的问题不在于流动相的PH值,缓冲溶液的PH值是比较稳定的。可能的关键的因素是,色谱柱平衡的问题,是否色谱柱还没有完全平衡就开始进样了,造成保留时间差异很大。

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  • boboenid007

    第3楼2011/05/29

    几点建议您是否愿意参考?
    1.每次使用pH计前,您是否用标准缓冲溶液有过校验?
    还有调ph时需要进行温度测试的(我们用的是便携式,每次检验前需要输入溶液温度,这个温度的要求是标准缓冲溶液与待测液是同一个温度条件下的)所以您能否保证每次检测ph值时溶液的温度都相同吗?
    2.测定ph时,您是否加转子搅拌或玻璃棒进行充分搅拌后才测试的ph呢?
    3.标准pH:2.5,可是您调的pH:3.5,检验标准pH调节误差范围应该是±0.1吧,首先这点,我有点疑惑,如果不影响您的图谱优化,或许可以忽略~~呵呵

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  • liuhaaitao3592

    第4楼2011/05/30

    一天之内几乎没有变化

    有水有渝(xky0230699) 发表:流动相配制好后不应该稳定性这么差的,测定过一天之内的流动相PH变化情况吗?

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  • liuhaaitao3592

    第5楼2011/05/30

    您指的是压力吗?我一直在旁边看着,上下浮动不超过20(进样前用流动相先跑了至少2小时),我觉得还是我操作有问题,但是就是不知道哪出了问题

    jhylc1976(jhylc1976) 发表:我觉得:关键的问题不在于流动相的PH值,缓冲溶液的PH值是比较稳定的。可能的关键的因素是,色谱柱平衡的问题,是否色谱柱还没有完全平衡就开始进样了,造成保留时间差异很大。

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  • xhwy2010

    第6楼2011/05/30

    "上下浮动不超过20"压力单位如果是psi,还算正常,如果是bar,那压力变化就太大了。

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  • yukepotato

    第7楼2011/06/25

    磷酸二氢钠是sodium Dihydrogen phosphate
    再说缓冲盐怎么可能在短短两天内pH变化这么多啊?

    liuhaaitao3592(liuhaaitao3592) 发表:关于流动相配制问题

    各位大侠好。
    本人现在在用HPLC-ECD检测6-OHDA,流动相是:25mM柠檬酸,125mM磷酸钠(文献中写的是sodium phosphate),100mg/lEDTA,30mg/lSOS,配置好后用磷酸调节pH至2.5(我们实际操作中,比2.5高).

    现有问题如下:

    1.关于pH:我第一次检测的时候,调节pH至3.5,但是出峰时间随着时间的进行也向后推移了,而且是每进一针都向后退0.1-0.2分钟,推测可能是由于pH变化导致的,于是3天后又测那瓶流动相的pH为3.8,又过了三天再测变为4.2.可是我第二次测时候,当天做完实验测得pH值和我第二天早上测得pH值几乎没有变化!于是我又迷茫了!莫名奇妙。于是又找其他原因。

    2.我用sodium phosphate,瓶子上写的是这个,但是化学式是磷酸二氢钠。但是就缓冲对来说,是不是没有太大影响?另外在配置流动相的时候有没有什么注意事项?比如操作有没有什么规定?(我是先放柠檬酸,再放磷酸二氢钠,然后让EDTA,最后放SOS,倒入蒸馏水定容至1升,然后调节pH,不知道是不是操作有问题?)多谢!!

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