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减少HPLC中微孔和微径应用的柱外效应

艺达思贸易

2011/11/16

作者：G. Todosiev, R. LaPolla, J. Batts • IDEX Health & Science LLC, 16 Leona Drive, Middleboro, MA 02346

简介

药物开发、组合化学的进步和台式质谱仪的问世向HPLC系统提出了新要求。高通量HPLC和降低的样品体积让短窄色谱柱成为新的“分析级标准”。

对于死体积影响谱带拓宽从而导致色谱结果已经进行了多年的研究及记录¹。在使用微孔色谱柱时，与分析色谱相比，由于对谱带拓宽的影响要大得多，死体积效应变得越来越重要。

很多时候，当没有达到预计塔板数或峰形不佳时，其原因往往归结于色谱柱。然而，在很多案例中其实是系统本身的问题，并且可能是由多个因素所导致的。要想最有效地使用微孔色谱柱，就有必要减少整个流路上的死体积。本资料将着重讨论最影响色谱性能的流路优化问题。

起因

如果使用的管道内径规格与所用色谱柱不匹配，并且或者由于使用不合适的连接件而造成不正确的色谱柱连接，色谱结果将可能受到负面影响。

相反，如果使用的管道内径规格适合所用色谱柱，则会显著地改善色谱结果。此外，使用聚合物连接件——尤其是通用连接器——极大地降低了来自不同色谱柱生产商的端头几何差异的影响，同时也有助于消除由不同技术人员的差异而造成的影响，保证最终获得更加一致、理想的色谱结果。

本资料着重关注对小型色谱应用管道与连接件的影响，其数据说明无论规格如何，对于许多色谱应用而言，正确的连接和使用内径较小的管道是更好的选择。

实验条件

本资料数据来自于Kromasil 3.5µm C18填充柱（依卡化学品公司，瑞典）。报告为萘测定的最后一个洗脱峰的塔板数和对称性数据。

流动相：乙腈：水（不同浓度）

流速： 4.6 mm 内径 – 1.0 mL/min

2.1 mm 内径 – 0.2 mL/min

检测：VWD @254 nm

半微量流动池

样品：尿嘧啶、苯乙酮、苯甲酸甲酯、甲苯、萘

进样：4.6 mm 内径 – 10 µL

2.1 mm 内径 – 2 µL

温度：25 ºC

仪器：Agilent 1100、Rheodyne 8125

为了给色谱性能设定基线，对分析级色谱柱（例如内径4.6mm的色谱柱和长度为50mm及250mm的色谱柱）进行了测试。以下数据来自于多次测试中的可复制结果。

结论

本资料展示了管道选择的重要性。可以看到管道内径的差别在较小色谱柱几何尺寸上得到放大，尤其是2.1mm内径色谱柱。在每个试验中，当仪器使用0.005’’内径管道时色谱柱性能得到改善。

值得注意的是，虽然对于较小色谱柱以及分析高保留元件时，更改流路管道内径似乎对色谱造成了最为明显的影响，数据显示减少流路管道内径——即使是对较大内径和更长的色谱柱——有助于极大地改善保留情况更糟的元件。作为一个例子，在相同工作条件下，只需将流路管道内径从.010″改变为.005″，中峰——苯甲酸甲酯——对250 x 4.6 mm色谱柱的塔板数就改善了10.1%，对50 x 4.6 mm色谱柱的塔板数改善了20.4% 。

合适的连接如此重要的另一个原因是因为不当连接会形成死体积，最终对峰形和塔板数产生负面影响。通用连接器有助于解决端头连接件的几何尺寸差异问题，而且还可手指拧紧。各个连接、各个用户之间压力一致，因而提高了连接的可重复性。

参考文献

(1) Neue, Uwe D. HPLC Columns: Theory, Technology, and Practice, Wiley-VCH, Inc.: New York, 1997: pp 352-359

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山羊

第1楼2011/11/24

值得参考，以后试验观察观察

0

xydell

第2楼2012/03/31

管路和接头的正确选择和使用确实是非常重要。

0

艺达思贸易

第3楼2014/06/03

正确使用确实有很多技巧，也请大家有经验的来发表发表意见。

0

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