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waters e2695 2489 高效液相色谱仪流速线性内部校验不合格,咋回事啊?

液相色谱(LC)

  • 一般我们半年都会对一些分析仪器做内部校验的,就是确认分析仪器的性能,保证其检测结果的准确性,这几天我在做Waters e2695 2489 HPLC的内部校验,其流速线性就是做不好啊,求助……
    流速线性 校验方法为:用0.01mg/ml的尿嘧啶在流速为0.5 ml/min,0.75 ml/min,1.0 ml/min,1.5 ml/min,2.0 ml/min下各分别进样三针。以流速和尿嘧啶保留时间的倒数为纵坐标作图。测定流速线性。 时间 3.0min,流动相:A70%水:C30%甲醇,柱温35℃,进样量20ul,波长254nm。色谱柱:waters Xbridge C18 3.5um 4.6*50mm column
    要求: 以流速对保留时间的倒数作图,得线性关系y=ax+b,R>0.99 b*1000/a的绝对值应≤100.0ul
    自己做的:其中线性0.5ml/min到1.5ml/min上是很好的,但是到了2.0这个流速就明显不行了,尿嘧啶保留时间延迟了0.04min(应该在0.32,结果做了很多遍都在0.36),这个是可以肯定的,小弟就不发数据了,初步分析:1,在色谱柱的另一端,用10ml容量瓶,秒表测流速,很不可思议,5分钟,刚好10ml。流速没有问题?2,更换色谱柱,更换新甲醇及纯化水,结果还是这么多3,在泵那里,没有发现漏液啊……
    各位高手,帮忙指点一下~~~·谢谢
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  • tangtang

    第1楼2011/12/04

    流速测定用称重法更准确一点。
    混合配成30%甲醇用单泵看看?

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  • jixuechao

    第2楼2011/12/04

    哦哦,单泵?怎么个做法啊?
    之前我联系了一下waters工程师 他说是色谱柱之前哪个地方漏液了的,要维护一下,唉,都不给我透露方法,不知道怎么做……

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  • tangtang

    第3楼2011/12/04

    您现在用的是:A70%水:C30%甲醇。
    配成30%甲醇,在A通道,再A100%吧。

    jixuechao(jixuechao) 发表:哦哦,单泵?怎么个做法啊?
    之前我联系了一下waters工程师 他说是色谱柱之前哪个地方漏液了的,要维护一下,唉,都不给我透露方法,不知道怎么做……

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  • bing1131

    第4楼2011/12/07

    小超同学:我是戴,我觉得你可以从以下几个方面分析下。
    1 检查一下1.5~2.5系统流量的准确性;
    2 检查一下系统在各个流速下的压力情况以及变化趋势;
    3 检查一下进样装置是否存在漏液等;
    4 溶液方面若是等度可以直接预先配制好,或者将溶液换一个通道试试;
    你可以先检查看,若不行,看是否可以换根柱子试试。

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  • bing1131

    第5楼2011/12/07

    流速看你已经测了2.0的非常准确,色谱柱也更换过,那么可以肯定系统除进样外是没有漏液的,如果进样漏液那么其他流速下它也是会漏的,所以你可以再判断下其他流速进样装置会不会漏?

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  • bing1131

    第6楼2011/12/07

    建议你还是预先混合好溶剂再进样看看!

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  • jixuechao

    第7楼2011/12/07

    好的,我再试试吧~~

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  • liufeilzu

    第8楼2011/12/08

    好像waters流速大于1.2ml/min流速后改变泵的冲程,误差是会大一些

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  • jixuechao

    第9楼2011/12/09

    终于找到原因了……软件有问题了……

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  • baibi

    第10楼2012/04/10

    when the calibration test failed,check the chromatogram first, try to change the process method. Then do the investigation, check the instrument, column, std, MP ..............

    jixuechao(jixuechao) 发表:终于找到原因了……软件有问题了……

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