国标控，带你解析《婴幼儿乳品和食品维生素ADE测定》；附带晒装备！

xiongbb

2011/12/04

私聊

厂商论坛

2011婴幼儿乳品企业大考结束，114家乳品企业获得了婴幼儿奶粉许可证。分享一下婴幼儿乳品检测中解析国标的过程；首先附一个婴幼儿乳品和食品维生素ADE的检测国标；其次，下文解析了实验过程中的注意事项；

如果之前有人解析过这个国标，纯属巧合；

大家有问题，可以跟帖，我会挑着我会的回答大家；

；这次先介绍维生素ADE；

营养物质：

	结构式	CAS号	分子式	外观	熔点	沸点	溶解性
VA		68-26-8	C20H30O	浅黄色结晶油液体	62-64℃	137-138℃	不溶于水和甘油。混溶于氯仿、乙醚。
VD3		67-97-0	C27H44O	白色无臭针状晶体	82-87℃	496.4℃	不溶于水，溶于乙醇、三氯甲烷和油脂
VE		59-02-9	C29H50O2	黄色油状液体	2.5-3.5℃	200-220℃ at 0.1mmHg	溶于脂肪和乙醇等有机溶剂中，不溶于水，对热、酸稳定，对碱不稳定，对氧敏感，对热不敏感，但油炸时维生素E活性明显降低。

中文名称：维生素A；英文名称：Vitamin A，retinol；其它名称：视黄醇

视黄醇耐光和耐氧性弱。易被脂肪氧化酶分解。

中文名称：维生素D3，胆钙化醇

英文名称：Vitamin D3，cholecalciferol

其它名称：烟碱缩胺，胆骨化醇

中文名称：α-维生素E

英文名称：α-Vitamin E

其它名称：α-生育酚tocopherol

标准溶液稳定性（这个必须要注意哦，包括从厂家买的标准品也需要按照国标用紫外分光光度计进行校正）-- 标准品厂商推荐几个：sigma、nu-chek、fluka、altech

配置各维生素10μg/ml 的标准应用液，连续7天进行测定，以峰面积RSD考察维生素标准溶液的稳定性，结果显示VD3、VE的标准溶液4℃至少稳定一周，VA标准溶液配制4天后峰面积略有下降。

样品前处理

注：食品中脂溶性维生素多是以酯类形式存在于食品中，而极少为游离状态，此外食品中的类脂类化合物也是食品中脂溶性维生素测定的主要干扰来源，因此需先将样品皂化，使待测维生素游离出来。选择合适的皂化条件，如皂化剂浓度、皂化温度及皂化时间等使样品皂化完全的条件对测定结果影响很大。

1、称取粉样10g（0.0001g）于250ml三角瓶中，50ml约45-50℃水溶解；
2、皂化：加入100mL 维生素C乙醇溶液，充分混匀后加入25mL 氢氧化钾水溶液，混匀，充氮盖上胶塞，53℃±2℃恒温水浴皂化45min，取出立刻冷却至室温；（1、维生素C的加入，是防止目标物氧化变质；2、乙醇皂化反应中乳化剂，可以保证脂类和氢氧化钾有充分的接触面积，推进反应的进行；3、恒温水浴皂化的过程中最好使用磁力搅拌，条件不具备的话可以每隔5分钟振荡一次，保证皂化完全；4、皂化会使VADE转化成不稳定的醇类，在常温常压下不稳定，极易被氧所破坏，所以充氮、避光、尽量缩短放置时间；）

3、提取：少量水将皂化液转移至500mL 分液漏斗中，加入100mL 石油醚，轻摇排气，室温下振荡10min，静置分层，将水相转入另一500mL 分液漏斗中，再次萃取。合并醚液，水洗至中性。醚液通过无水硫酸钠过滤脱水，滤液收至500mL旋蒸瓶中，40℃±2℃旋蒸。残渣用石油醚转移至10mL容量瓶中，定容；（1、转移皂化液时用少量水清洗三遍三角瓶，防止有损失）

4、取2.0mL石油醚放入试管A中，40℃±2℃氮气吹干。5.0mL甲醇振荡溶解，不低于5000rpm 离心10min。进样检测维生素A、E；
5、取7.0mL石油醚放入试管B中，40℃±2℃氮气吹干。2.0mL正己烷振荡溶解，不低于5000rpm 离心10min；
6、取500μL B管中的待测液进样，根据标准的出峰时间收集样品中维生素D3的馏分，40℃±2℃氮气吹干，1.0mL 甲醇溶解定容，进样检测；

色谱分析

色谱柱：C18柱，250*4.6mm，5μ；（推荐agela XBP-C18；XBP-C18（2）；岛津 ODS-2）
流动相：甲醇（上面所有溶剂都是色谱纯，推荐几个厂家-merck、霍尼韦尔、迪马、fulltime）上面用的水是屈臣氏；
流速：1.0mL/min

检测器：紫外检测器（仪器推荐岛津、agilent）

波长：325nm（VA），264nm（VD），294nm（VE）

柱温：30℃
色谱图

维生素A标准品：3ug/mL（猜猜工作站是谁家的？哈哈，下面有标准曲线）