FISH样本制备到发单过程

zhbvssong

2012/01/19

私聊

生物显微镜

FISH样本制备到发单过程

样本的制备

1. 1000转/分离心悬液5分钟，用1ml新的固定液重新悬浮细胞。4℃保存固定的样本30分钟以上，直至FISH检测前。若要长期保存，-20℃保存在固定液中
2.直接滴加细胞悬液至1-2片预冷的玻片上，

样本的老化

1. 将样本片子放入2×SSC 37℃1小时

2. 从70%乙醇中取出，依次放入85%、100%乙醇中重复以上步骤

样本DNA的变性

1.将湿润的杂交盒放入37℃孵箱内预热至37℃

2. 染色缸中加入变性溶液，73±1℃水浴30分钟以上。

3. 用镊子拿出片子立刻放入室温的70%乙醇洗液中

5. 从70%的乙醇中拿出片子，依次放入85%、100%乙醇中重复上述步骤

在加入探针溶液前将片子加热至45-50℃2分钟

探针的预备

1. 让探针加热至室温，降低探针的粘度，使用合适的移液管

2. 振荡混合。用微型离心机将内容物离心（1-3秒）至底部。轻轻振荡再次混匀

杂交

1. 用树胶封片：用5ml的注射器吸去树胶，在盖玻片的四周加上树胶

2. 将封好的片子放入37℃预热的杂交盒中，盖紧盖子，37℃孵育6-24小时

杂交后的冲洗

储存

在暗处-20℃保存杂交玻片。

FISH结果的观察

在荧光显微镜下观察时

选择最好的视野区，计数细胞核

选择样本分布稀疏的区域，避免视野下出现成团的细胞。只计数信号不连续的细胞。

计数扫描：

依据荧光信号的计数结果，结合染色体计数标准作出正确的诊断。