RF-5301荧光分光光度计浓度如何确定？

notell 2012/03/02

用RF-5301[url=http://www.instrument.com.cn/zc/fs.asp][color=#0365bf]荧光分光光度计[/color][/url]扫描药物与DNA作用后的图谱，药物与DNA分别的浓度如何确定，是不是两者要在同一个数量级的。 根据查找到的文献，说药物的浓度与做紫外时的浓度差不多，可以再低一个数量级。但是我做紫外时药物的浓度为 4×10－5mol/l，而拿去做荧光的时候，荧光强度达到2000多，稀释3000倍后，荧光强度大150左右，这是为什么呢？这样正常吗。如果拿稀释3000倍后的药物去做紫外已经扫不出谱图了。这种现象正常吗？ DNA几乎没有荧光，是不是就是说DNA的浓度为多少都可以呢？ 在药物里滴加DNA后，荧光强度增强，稍有蓝移，当药物与DNA比为1：2时，强度降低。 但是我找到的文献都是在药物里滴加DNA后，荧光强度减弱，红移。谁能帮我分析下？ 所用的紫外为PE Lambda35 荧光检测极限要比紫外高2-3个数量级，再者紫外测的是吸收，而荧光测的是发射光谱，接收器也不同，所以二者浓度很可能需要不同的浓度。理论上说如果接受器的响应可以无限大，是没有问题的，但荧光的接收器是光电倍增管，灵敏度很高，很容易就溢出了，就无法测量了。 由于一般情况下荧光接收器的灵敏度比较高，对于荧光太强的溶液可以采取稀释或者减少样品量的方法。 至于说加DNA荧光增强，可以考虑是否药品浓度太大，吸收了部分荧光，随着DNA添加相当于药品稀释，荧光逐渐增强。达到一定的浓度后，随着DNA添加，又逐渐下降。