提问帖（3.23）：HPLC色谱的类型有哪些呢？

1.液固吸附色谱
2.液液分配色谱
3.离子交换色谱
4.离子色谱
5.离子对色谱
6.排阻色谱
7.亲和色谱

答对了一部分，还有其他答案吗？

液—液分配色谱法　　(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化学键合相色谱(ChemicallyBonded Phase Chromatography)

　　流动相和固定相都是液体。流动相与固定相之间应互不相溶（极性不同，避免固定液流失），有一个明显的分界面。当试样进入色谱柱，溶质在两相间进行分配。达到平衡时，服从于高效液相色谱计算公式：

　　
高效液相色谱计算公式式中，cs—溶质在固定相中浓度；cm--溶质在流动相中的浓度；Vs—固定相的体积；Vm—流动相的体积。LLPC与GPC有相似之处，即分离的顺序取决于K，K大的组分保留值大；但也有不同之处，GPC中，流动相对K影响不大，LLPC流动相对K影响较大。
　　a. 正相液 — 液分配色谱法(Normal Phase liquid Chromatography):流动相的极性小于固定液的极性。

　　b. 反相液 — 液分配色谱法(Reverse Phase liquid Chromatography):流动相的极性大于固定液的极性。

　　c. 液 —液分配色谱法的缺点：尽管流动相与固定相的极性要求完全不同，但固定液在流动相中仍有微量溶解；流动相通过色谱柱时的机械冲击力，会造成固定液流失。上世纪70年代末发展的化学键合固定相（见后），可克服上述缺点。现在应用很广泛（70~80%）。

液—固色谱法　　流动相为液体，固定相为吸附剂（如硅胶、氧化铝等）。这是根据物质吸附作用的不同来进行分离的。其作用机制是：当试样进入色谱柱时，溶质分子(X) 和溶剂分子(S)对吸附剂表面活性中心发生竞争吸附（未进样时，所有的吸附剂活性中心吸附的是S），可表示如下：Xm nSa====== Xa nSm

　　式中：Xm--流动相中的溶质分子；Sa--固定相中的溶剂分子；Xa--固定相中的溶质分子；Sm--流动相中的溶剂分子。

　　当吸附竞争反应达平衡时：

　　K=[Xa][Sm]/[Xm][Sa]

　　式中：K为吸附平衡常数。[讨论：K越大，保留值越大。]

离子交换色谱法　　(Ion-exchange Chromatography)

　　IEC是以离子交换剂作为固定相。IEC是基于离子交换树脂上可电离的离子与流

　　
离子交换色谱柱动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换，依据这些离子以交换剂具有不同的亲和力而将它们分离。以阴离子交换剂为例，其交换过程可表示如下：
　　X-(溶剂中) (树脂-R4NCl-)=== (树脂-R4N X-) Cl- (溶剂中)

　　当交换达平衡时：

　　KX=[-R4N X-][ Cl-]/[-R4N Cl-][ X-]

　　分配系数为：

　　DX=[-R4N X-]/[X-]= KX [-R4N Cl-]/[Cl-]

　　[讨论：DX与保留值的关系]

　　凡是在溶剂中能够电离的物质通常都可以用离子交换色谱法来进行分离。

离子对色谱法　　(Ion Pair Chromatography)

　　离子对色谱法是将一种 ( 或多种 ) 与溶质分子电荷相反的离子 ( 称为对离子或反离子 )加到流动相或固定相中，使其与溶质离子结合形成疏水型离子对化合物，从而控制溶质离子的保留行为。其原

　　
离子色谱仪流程示意理可用下式表示：X 水相 Y-水相=== X Y-有机相
　　式中：X水相--流动相中待分离的有机离子（也可是阳离子）；Y-水相--流动相中带相反电荷的离子对（如氢氧化四丁基铵、氢氧化十六烷基三甲铵等）；XY---形成的离子对化合物。

　　当达平衡时：

　　KXY = [X Y-]有机相/[ X ]水相[Y-]水相

　　根据定义，分配系数为：

　　DX= [X Y-]有机相/[ X ]水相= KXY [Y-]水相

　　[讨论：DX与保留值的关系]

　　离子对色谱法(特别是反相)发解决了以往难以分离的混合物的分离问题，诸如酸、碱和离子、非离子混合物，特别是一些生化试样如核酸、核苷、生物碱以及药物等分离。

离子色谱法　　(Ion Chromatography)

　　用离子交换树脂为固定相，电解质溶液为流动相。以电导检测器为通用检测器，为消除流动相中强电解质背景离子对电导检测器的干扰，设置了抑制柱。试样组分在分离柱和抑制柱上的反应原理与离子交换色谱法相同。

　　以阴离子交换树脂（R-OH）作固定相，分离阴离子（如Br-）为例。当待测阴离子Br-随流动相（NaOH）进入色谱柱时，发生如下交换反应（洗脱反应为交换反应的逆过程）：

　　
担体图示抑制柱上发生的反应：
　　R-H Na OH- === R-Na H2O

　　R-H Na Br- === R-Na H Br-

　　可见，通过抑制柱将洗脱液转变成了电导值很小的水，消除了本底电导的影响；试样阴离子Br-则被转化成了相应的酸HBr-，可用电导法灵敏的检测。

　　离子色谱法是溶液中阴离子分析的最佳方法。也可用于阳离子分析。

空间排阻色谱法　　(Steric Exclusion Chromatography)

　　空间排阻色谱法以凝胶 (gel)为固定相。它类似于分子筛的作用，但凝胶的孔径比分子筛要大得多，一般为数纳米到数百纳米。溶质在两相之间不是靠其相互作用力的不同来进行分离，而是按分子大小进行分离。分离只与凝胶的孔径分布和溶质的流动力学体积或分子大小有关。试样进入色谱柱后，随流动相在凝胶外部间隙以及孔穴旁流过。在试样中一些太大的分子不能进入胶孔而受到排阻，因此就直接通过柱子，首先在色谱图上出现，一些很小的分子可以进入所有胶孔并渗透到颗粒中，这些组分在柱上的保留值最大，在色谱图上最后出现。
7.亲和色谱

HPLC按分离机理的分类



类 型 主要分离机理 主要分析对象或应用领域
1.吸附色谱 吸附能，氢键 异构体分离、族分离，制备
2.分配色谱 疏水分配作用 各种有机化合物的分离、分析与制备
3.凝胶色谱 溶质分子大小 高分子分离，分子量及其分布的测定
4.离子色谱
离子交换色谱 库仑力 无机离子、有机离子分析
离子排斥色谱 Donnan膜平衡 有机酸、氨基酸、醇、醛分析
离子对色谱 疏水分配作用 离子性物质分析
5.疏水作用色谱 疏水分配作用 蛋白质分离与纯化
6.手性色谱 立体效应 手性异构体分离，药物纯化
7.亲和色谱 生化特异亲和力 蛋白、酶、抗体分离，生物和医药分析

1．吸附色谱（Adsorption Chromatography） 　　2．分配色谱（Partition Chromatography） 　　3．离子色谱（Ion Chromatography） 　　4．体积排阻色谱（Size Exclusion Chromatography） 　　5．亲和色谱（Affinity Chromatography）

HPLC按分离机理的分类类 型 主要分离机理 主要分析对象或应用领域
吸附色谱 吸附能，氢键 异构体分离、族分离，制备
分配色谱 疏水分配作用 各种有机化合物的分离、分析与制备
凝胶色谱 溶质分子大小 高分子分离，分子量及其分布的测定
离子交换色谱 库仑力 无机离子、有机离子分析
离子排斥色谱 Donnan膜平衡 有机酸、氨基酸、醇、醛分析
离子对色谱 疏水分配作用 离子性物质分析
疏水作用色谱 疏水分配作用 蛋白质分离与纯化
手性色谱 立体效应 手性异构体分离，药物纯化
亲和色谱 生化特异亲和力 蛋白、酶、抗体分离，生物和医药分析

　　通常将液相色谱法按分离机理分成吸附色谱法、分配色谱法、离子色谱法和凝胶色谱法四大类。其实，有些液相色谱方法并不能简单地归于这四类。按分离机理，有的相同或部分重叠。但这些方法或是在应用对象上有独特之处，或是在分离过程上有所不同，通常被赋予了比较固定的名称。

应助达人

1.吸附色谱 吸附能，氢键 异构体分离、族分离，制备
2.分配色谱 疏水分配作用 各种有机化合物的分离、分析与制备
3.凝胶色谱 溶质分子大小 高分子分离，分子量及其分布的测定
4.离子色谱 疏水分配作用 离子性物质分析
5.疏水作用色谱 疏水分配作用 蛋白质分离与纯化
6.手性色谱 立体效应 手性异构体分离，药物纯化
7.亲和色谱 生化特异亲和力 蛋白、酶、抗体分离，生物和医药分析