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跑完样后，如何冲洗柱子

minus213

2012/04/17

液相色谱（LC）

我的流动相是 A:40mM磷酸盐缓冲溶液 B 乙腈：甲醇：水(45:45:10)
跑完样后我用10%乙腈，60%乙腈，90%乙腈冲，
请教一下：（1）各种溶剂冲洗的时间如何判断，根据基线或压力是否稳定了吗？
（2）用多大的流速？
（3）如果用梯度流速的话，换流速的标准是什么，是不是压力稳了才能换流速？

我是液相菜鸟，请大家多多指教。
还有个问题：接上柱子后，用10%乙腈冲，该冲多长时间，怎样判断？

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有水有渝

第1楼2012/04/17

应助达人

反相色谱柱
如果流动相里有酸、碱、盐等以10%甲醇1.0流速冲洗60分钟，再以纯甲醇（或乙腈，但一些泵用纯乙腈时常出故障）清洗30-45分钟。
如果流动相只含甲醇、乙腈、水则可直接以甲醇或乙腈清洗60分钟。
判断标准一般以10-20倍柱体积的清洗液可完全置换色谱柱中的原来流动相。

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分
该帖子已被版主-zhaohua8011加3积分，加2经验;加分理由:讲得不错

chy57589893

第2楼2012/04/17

学习了
有水有渝(xky0230699) 发表:反相色谱柱
如果流动相里有酸、碱、盐等以10%甲醇1.0流速冲洗60分钟，再以纯甲醇（或乙腈，但一些泵用纯乙腈时常出故障）清洗30-45分钟。
如果流动相只含甲醇、乙腈、水则可直接以甲醇或乙腈清洗60分钟。
判断标准一般以10-20倍柱体积的清洗液可完全置换色谱柱中的原来流动相。

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150

第3楼2012/04/17

额有酸、碱、盐等我们一般都只直接90%的水冲洗15分钟左右的有时间的话就多冲一段时间因为柱子每天都用不知道这样是否合理呢
有水有渝(xky0230699) 发表:反相色谱柱
如果流动相里有酸、碱、盐等以10%甲醇1.0流速冲洗60分钟，再以纯甲醇（或乙腈，但一些泵用纯乙腈时常出故障）清洗30-45分钟。
如果流动相只含甲醇、乙腈、水则可直接以甲醇或乙腈清洗60分钟。
判断标准一般以10-20倍柱体积的清洗液可完全置换色谱柱中的原来流动相。

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lucan31977044

第4楼2012/04/17

把A相换成超纯水
B相换成甲醇（不建议乙腈，一方面大部分泵不耐乙腈，另一方面乙腈比甲醇贵）
先设A:B=5:95 以大比例的水相冲洗掉柱子中的缓冲盐
再加大有机相比例冲洗柱子
最后以纯有机相保存柱子

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suiniubei

第5楼2012/04/18

楼上几位说的差不多。
　
　不过我们是无论是含不含缓冲盐，做完后都要用高比例水的流动相（通常为甲醇：水＝20：80）冲洗。含盐的话至少冲洗30分钟，不含盐的话冲洗15分钟左右。再过渡到纯甲醇或纯乙腈，冲40分钟左右或更长时间。通常是基线平了以后再15分钟左右停机。
　有人说纯乙腈冲洗会造成单向阀故障，我们从来没有遇到过。无论岛津、安捷伦、还是沃特斯，还是国产机。故对此说法存在怀疑。

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