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确定PCR循环数的一点方法

  • 省部重点实验室
    2012/05/05
    • 私聊

PCR

  • 确定循环数的基本原理是: 产物能够保证你进一步分析操作的最小循环数.因为过多的循环
    数容易造 成ERRORS和非特异性产物的积累 产物的量不够, 优化的方法有:


    1. 增加TEMPLATE

    2. 增加循环数


    如何确定循环数,有一个方法.

    做一个PCR体系,40循环,50ul, 分别在20,25,30,35循环时从体系中取5ul,一起跑电泳分析

    .从而确定最佳的循环数


    另一个会影响PCR特异性的是PCR cycling时在两个温度间变化的速率(ramping rate).当然
    是越高 越好.不过咱们大部分条件有限,就那么几台PCR仪,也没有多少挑选的余地
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    +关注 私聊

  • diameter32

    第2楼2012/08/10

    不错的方法哦，谢谢

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