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日立F-7000检测伏马毒素

  • 秋月芙蓉
    2012/05/30
  • 私聊

分子荧光光谱

  • 以下是xcm-105051版友给我的站短,希望大家一起来帮忙,谢谢!

    您好,我现在正在用日立的F-7000来检测伏马毒素,伏马毒素本身没有荧光,用OPA试剂衍生后再来测,但衍生后的化合物不稳定,荧光会随着时间衰减。
    伏马毒素是溶于乙腈:水=1:1的溶液中的。所以我配制了一系列浓度的伏马毒素标准溶液,空白是乙腈水(因为空白与OPA试剂衍生后也有荧光,但低于系列浓度的伏马毒素衍生后的荧光值)。然后对分别空白和系列浓度的伏马毒素衍生后进行时间扫描。分别计算前30S的荧光平均值,再绘制标准曲线。
    问题是每次的的标准曲线结果都比较好(相关系数能到0.99以上,),但是每天和每天测的荧光值有一定差别,就是曲线方程不一样。
    这是因为是有系统误差呢?还是荧光受条件因素较多,所以每次的都不一样呢?
    还有就是我应该怎样来调零和扣除空白呢?
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  • 悠旸

    第1楼2012/05/30

    荧光受环境温度影响比较大的,不必追求每天的强度一致,反正定量也是要求每天做曲线的。

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  • xcm-105051

    第2楼2012/05/31

    2
    是的,我现在测的时候,是在室温下。我每天下午测,每天和每天不一样,有的时候差别挺大的,温度的影响有这么大吗?
    还有,荧光定量的话,是要每次测样品时都建一条标曲吗?

    悠旸(ihqs) 发表:荧光受环境温度影每响比较大的,不必追求每天的强度一致,反正定量也是要求每天做曲线的。

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  • sunny04141125

    第3楼2012/05/31

    有些物质属于光敏物质,光照会对样品的荧光信号产生干扰。
    举个例子,维生素C本身见光后其有效成分就会慢慢衰减,在应用荧光分光光度计测定其含量(衍生物)的时候,强光会使其荧光信号不稳定,逐渐衰减,且这种现象是不可避免的。
    减缓方法,可以先将激发处的快门关闭(选择自动模式),测量的时候快门自动打开,不测的时候快门关闭从而保证样品荧光信号。
    还有就是在操作的过程中尽可能的避光,加快实验的速度。

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  • 悠旸

    第4楼2012/06/01

    xcm-105051(xcm-105051) 发表:2
    是的,我现在测的时候,是在室温下。我每天下午测,每天和每天不一样,有的时候差别挺大的,温度的影响有这么大吗?
    还有,荧光定量的话,是要每次测样品时都建一条标曲吗?

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