提问帖（6.18）：色谱柱的孔径对选择色谱柱有什么影响？

选择什么样填料孔径的柱子是根据分子量的大小来确定的。我们先了解一下填料孔径对分离度有什么样的影响，120A的色谱柱通常适用的范围为分子量<10000的，如果分子量太大，在填料为120A孔径的柱子上分离度会比较差，因为样品分子在色谱柱上有较好的是由于可以进入到填料的微孔里面，与键合在表面上的C18长链相互作用，通常孔径直径需要大于分子直径的3倍以上才不会对分析造成影响。
因此一般分子量10000一下的化合物建议用120A的柱子来分析，分子量大于1W小于20W的用300A的来分析，分子量大于20W的就要用凝胶柱了。

色谱柱内径决定载样量，载样量与内径的平方成正比；色谱柱长度与塔板数成正比，与柱压成正比；粒径影响涡流扩散相，粒径越小涡流扩散相越小，柱效越高，粒径与柱效近似成反比；粒径越小，压力也越大，压力与粒径的平方成反比。填料孔径对分析对象的分子量有限制，当孔径为分析物尺寸的5倍以上时，分析物才能顺利通过孔隙，孔径处于60~120 Å的色谱柱适用于相对分子量小于10000的分析物，孔径为300 Å的色谱柱可以满足分子量处于10000以上的大分子化合物分析。

孔径，指的是硅胶表面上的小孔的直径，是一个平均值。常规的液相色谱柱都是在硅胶表面健合特定的官能团，孔径的大小影响官能团健合的密度。同等粒径的硅胶，孔径越大，硅胶的比表面积越小，硅胶表面健合的官能团密度越低，也就是C%越低；反之，孔径越小，比表面积越大，官能团健合的密度越高。另外，如果用来分离生物大分子，就要选择孔径较大的(例如300A)的填料，这样才会得到充分的保留。

我怎么觉得你最后一句和前面矛盾啊，大孔径的填料所具有的C%相对较少，怎么能使样品"充分保留"呢？

应助达人

似乎出过类似的题了 啊

应助达人

柱内径的影响：
柱内径小分离效果好，柱内径大处理量大，但柱内径过大，将导致担体不能均匀地分布在色谱柱中。
相比大（固定液液膜厚度小）有利于提高柱效。

应助达人

通常毛细管柱内径越小，其分离效率就越高，完成分离任务所需的柱长就越短。但细的色谱柱的柱容量小，容易超载。同样内径的色谱柱也因固定液的液膜厚度不同而具有不同的柱容量。口径大的毛细管色谱柱，其液膜厚度一般也大，故柱容量也大，但柱效不及小口径柱子。柱子长了，可提高分离效率，但其也面临着分析时间延长、压力降大和需要较高温度等问题。
我们应根据不同的样品，在满足柱分离效率的情况下，选择合适的毛细管柱。

应助达人

色谱柱内径决定载样量，载样量与内径的平方成正比；色谱柱长度与塔板数成正比，与柱压成正比；粒径影响涡流扩散相，粒径越小涡流扩散相越小，柱效越高，粒径与柱效近似成反比；粒径越小，压力也越大，压力与粒径的平方成反比。填料孔径对分析对象的分子量有限制，当孔径为分析物尺寸的5倍以上时，分析物才能顺利通过孔隙，孔径处于60~120 Å的色谱柱适用于相对分子量小于10000的分析物，孔径为300 Å的色谱柱可以满足分子量处于10000以上的大分子化合物分析。