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薄层色谱(TLC)
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薄层色谱小知识
xss2011
2012/06/22
私聊
薄层色谱(TLC)
1、怎样提高点样效率?
点样是造成TLC定量误差的主要来源。实验证明:定量毛细管更适合较小体积的点样;微量注射器更适合较大体积的点样。这主要是因为微量注射器受小气泡、溶液回爬现象
种植牙
的影响较大。为避免不同定量毛细管间的点样误差、建议一块薄层板上最好用同一只定量毛细管。但应注意更换样品时,应将毛细管用超声波或不同极性溶剂清洗干净。在制备样品时,溶样溶剂黏度不能过高,以便于点样;溶剂沸点过低则进样体积易变,过高则会改变展开剂组成;对样品溶解度过高会使样点发生空心现象;常用的溶剂为甲醇、乙醇、丙酮。经典TLC样点原点一般为直径3mm点间距1--2cm底边距1。5cm;HPLC样点原点一般为直径1mm点间距5mm底边距1cm。
2、展开剂的选择
TLC与HPLC相比,一个突出的优点就是流动相的选择具有更大的灵活性。流动相的选择的目的是使绝大部分样品的RF值位于0。1--0。7之间并达到较好的分离,与此对应的是流动相要有适当的强度和组成。流动相强度越大,溶质RF值越大,但很可能降低分离能力;另外单一溶剂很难分离较复杂的混合物,根据
上海牙防所
相似相溶原理,要使用多元溶剂体系。一般展开剂体系选择如下:根据分离样品性质、薄层色谱板性质选择一个二元溶剂体系,通过调节溶剂比例以寻求适合RF值,适合的RF值找到后,再寻求极性参数相同的二元溶剂体系两个,以这三个组成为三点组成一个三角形,则可看到:三角形顶点是二元体系,边是三元体系,三角形内是四元体系,并且极性一致,可根据几何原理得出任一点组成。这种方法较为直观,也较简单。
3、TLC的通用显色方法
理想的显色希望灵敏度高、斑点颜色稳定、斑点与背景间的对比度好、斑点的大小及颜色的深度与物质的量成正比。在样品组成并不完全已知的情况下,通用显色方法显得成尤为重要。通用显色法主要有:
(1)、紫外照射法:方便,不破坏样品;
(2)、碘蒸气法:通用性强,与紫外法结合灵敏度高于该两法单独使用;
(3)、荧光试剂:制造荧光背景,使原来紫外下无荧光物质被鉴别,有荧光物质更明显;
(4)、硫酸溶液:对绝大多数有机物有效,但有破坏性。
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天津天光光学仪器
第1楼
2012/07/08
知识性很强,可以使用专用点样笔,可裁剪铝基硅胶g薄层板
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