工程菌高密度发酵

试剂的配制

1. 种子液(1000ml, pH7.0)：

Trypton 16g

Yeast Extract 10g

Glycerol 20ml

NaCl 5g



2. 发酵液（600ml）：

Trypton 50g

Yeast Extract 50g

Glycerol 100ml

MgSO4·7H2O 3g



3. 补料（2400ml）：

Trypton 200g

Yeast Extract 100g

Glycerol 1000ml

MgSO_4·7H₂O 12g



4. 盐（1000ml,pH7.2）：

KH₂PO₄ 20g

K₂HPO₄ 40g

Na₂HPO₄·12H₄O 70g

(NH₄)₂SO₄ 12g

NH₄Cl 0.2g



仪器

Biostat 5L自动发酵罐，德国B.Braun公司。



操作步骤

1. 消毒所有试剂、管路等。

2. 发酵罐消毒。

3. 发酵用菌种筛选 取-70℃保存的甘油菌种划平板，37℃培养过夜，挑取单菌落于5ml试管中，振荡培养至A₆₀₀0.6左右，按20ml/L接种于含种子液的500ml摇瓶中，振荡培养至对数中期，作为发酵罐的种子液。

以上环节应该在实验进行前准备好。

4. 打开仪器，调节相应的参数。

5. 在发酵罐中加入发酵液、盐。

6. 将种子液按40ml/L接种至发酵罐，控制适当范围的参数：溶氧为≥30%；温度为37℃；pH值设定为7.0，流加300ml/L的氨水以保持恒定。

7. 当发酵密度到一定范围的时候（溶氧开始上升）。

8. 诱导目的蛋白表达。

9. 收集菌体

10. 清洗发酵罐，关闭仪器。

发酵已经有非常悠久的历史了