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分光光度使用经验点滴（转帖）

sunchao

2006/05/22

紫外可见分光光度计（UV）

一、分光光度使用经验点滴
1.坚持标准溶液现用现配，不使用过期标准液。使用仪器之前，一般要校正仪器，看看空白时透光率是否是100%。

2.比色皿应该保持清洁，干燥。如有污物，可用稀盐酸清洗后，再用1：1的酒精与乙醚清洗凉干。禁止用硬物碰或擦透明表面。或者建议使用10%的盐酸溶液浸泡，然后用无水乙醇冲洗2~3次。比色皿具有方向性，使用时要注意，仔细观察比色皿上方应该有一个箭头标志的，代表入射光方向。注入和倒出溶液时，应该选择非透光面。最好使用配对的比色皿。

3.防止仪器振动，影响光学系统。

4.在开机状态，不测量时，应该打开样品池门，否则，影响光电传感器寿命。

5.样品集中测量，避免开机次数，可延长光源寿命。

6.仪器工作稳定性差，漂移大时，应该考虑更换光源或光电元件。

7. 一般分光仪主要有光源部分、光路部分、检测器三的部分，光路有的情况是稳压电源问题，钨灯问题及钨灯位置与光路不一致等问题。光路部分主要有比色皿不干净，灯光与比色皿位置不合适（在正常情况下，比色皿位置放一张白纸，可以清楚看到光斑形状呈显矩形，属于正常情况。对于检测器大多数是正常的，但是光敏管或者光电管有时侯也会出现问题。

8.若峰出现很多“毛刺”，可能是扫描速度过快，浓度过高或者狭缝过小；

9. 紫外分光光度计用来测紫外光时,石英皿用来调零时不稳定,是由那些原因？
　　首先确定是否用成玻璃比色皿,判断方法在紫外区任一波长下用空气调零测比色皿的吸光度如果超过1ABS则比色皿用错.再次用空气调零看零点是否稳定,如不稳则是仪器问题,如空气稳定而放入石英皿后不稳定,则检查是否空白溶液吸光度太高,是否空白溶液药品过期,或者空白溶液透明范围不适合此波长测量比如甲醇在210NM以下吸光度很大无法调零。

10. 仪器狭缝宽度的选择
　　狭缝的宽度会直接影响到测定的灵敏度和校准曲线的线性范围。狭缝宽度过大时，入射光的单色光降低，校准曲线偏离比耳定律，灵敏度降低；狭缝宽度过窄时，光强变弱，势必要提高仪器的增益，随之而来的是仪器噪声增大，于测量不利。选择狭缝宽度的方法是：测量吸光度随狭缝宽度的变化。狭缝的宽度在一个范围内，吸光度是不变的，当狭缝宽度大到某一程度时，吸光度开始减小。因此，在不减小吸光度时的最大狭缝宽度，即是所欲选取的合适的狭缝宽度。

11. 紫外测量吸光度值不准，什么原因，请指教
（1）仪器调零后跳动大的话那可能是仪器有问题.
（2）调零稳定的话,看样品浓度是否过高,最好控制在0-1个吸光度之间.
（3）浓度合适的话,看是否比色皿没擦干净,一般可用蒸馏水冲洗一下,擦干后用镜头纸擦干净.
（4）检查样品是否稳定,如果零点不变而放上样品变化,那么是样品有变化,检查样品是否有问题.

12.关于仪器维护
（1）仪器工作电源一般为220V,允许10%的电压波动.
（2）为了延长光源使用寿命,在不使时不要开光源灯.
（3）单色器是仪器的核心部分,装在密封盒内不能拆开,为防止色散元件受潮发霉,必须经常更换蛋色器盒干燥剂.
（4）必须正确使用吸收池,保护吸收池光学面.
（5）光电转换元件不能长时间暴光,应避免强光照射或受潮积尘.

二、固体样品的测定
　　固体分为透明的和不透明的，用仪器测都可以测，但形状有一定要求，根据各个厂家不同，都有其要求，主要是固定问题，均需要配合附件使用。
　　透明固体采用固体样品池架附件，可方便固定在样品室内。
　　不透明固体又分为两种，
　1、面光滑固体，需用镜面反色附件（利用物体镜面反色原理）；
　2、表面不光滑固体采用积分球附件可完成仪器对其进行的测量（利用物体慢反色原理）。

精
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shaweinan

第1楼2006/05/22

内容很好，很有用。

0

tangldy

第2楼2006/05/23

对第一条我有不同看法

“坚持标准溶液现用现配”
标准溶液现用现配反而增大了不确定性。

“一般要校正仪器，看看空白时透光率是否是100%”
不是看而是调整成为100％。

0

精
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SOMS课题组

第3楼2006/05/23

一般高浓度标液很稳定的，低浓度的要现作现配比较好，要看什么情况的！！

0

精
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wtatxj1030

第4楼2006/06/01

兼容并包，呵呵

0

slayer_axe

第5楼2006/06/02

绝大部分同意，不过标液一条就见仁见智吧，呵呵

0

xiexianglin

第6楼2006/06/02

好的，保存了
多谢分享！！

0

wangyongliang

第7楼2006/06/02

谢谢分享！

0

bluegirl303

第8楼2006/06/09

不错，经验之谈，多多借签

0

xie_8324

第9楼2006/08/30

非常好，谢谢经验共享！

0

vagrantboy

第10楼2006/09/06

学习了先！！！

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